轉(zhuǎn)化細(xì)胞通過(guò)高潮、射線、微波以及器械進(jìn)行滅菌或除菌的方法均為物理滅菌方法。

(1)紫外線消毒 用于消毒空氣、操作臺(tái)面和一些不能用干熱、濕熱滅菌的培養(yǎng)器皿，如塑料培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板等。這是常使用的消毒方法之一。

(2)干熱滅菌 主要用于玻璃器皿的滅菌。將用于細(xì)胞培養(yǎng)的器皿放人干燥箱內(nèi)，加熱至160℃，保溫90-120 min。用于RNA提取實(shí)驗(yàn)的用品則需180℃，保溫5-8 h。

(3)濕熱滅菌 此方法也稱(chēng)為高壓蒸汽滅菌，是zui有效的一種滅菌方法。主要應(yīng)用范圍是布類(lèi)、橡膠制品(如膠塞)、金屬器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加熱后不發(fā)生沉淀的無(wú)機(jī)溶液(如Hanks液、PBS、20×SSC等)。手動(dòng)高壓滅菌鍋操作如下：

①首先查看高壓鍋內(nèi)的水是否充足，放人物品蓋好蓋。

②加熱高壓鍋。將放氣閥打開(kāi)，放氣5—10 min，以排除鍋內(nèi)的冷空氣。

③待鍋內(nèi)水沸騰后，落下放氣閥繼續(xù)升溫升壓，玻璃器皿等用15磅(121℃)30 min，膠塞、塑料制品、溶液等可用10磅(115 ℃)20 min。調(diào)節(jié)火力大小保持該壓力。

④停止加熱，待壓力自然下降至0再打開(kāi)放氣閥排汽，開(kāi)蓋，取出高壓滅菌的物品烘干。

電熱自動(dòng)滅菌鍋使用說(shuō)明(型號(hào)：SANYO Autoclave MLS-3020)：

①放氣筒加水至LOW水平線處，轉(zhuǎn)化細(xì)胞將與高壓鍋相連的導(dǎo)氣管插入放氣筒里，然后將放氣筒歸于原位。

②打開(kāi)高壓鍋蓋，加入蒸餾水至高壓鍋底的水位線，水位線位于V型凹槽的1/3-2/3處。

③打開(kāi)電源。

④設(shè)定高壓溫度及時(shí)間，高壓鍋的溫度范圍為105-121℃，高壓滅菌一般采用121℃20—30 min。

⑤把待高壓的物品置于高壓鍋內(nèi)，順時(shí)針?lè)较驅(qū)xhaust鈕旋至close位置。

⑥關(guān)閉高壓鍋蓋，旋至顯示屏上左上角的紅亮點(diǎn)剛出現(xiàn)為止。

⑦按start鈕，開(kāi)始高壓，在溫度達(dá)80℃時(shí)顯示器開(kāi)始顯示溫度，當(dāng)溫度達(dá)到所需的設(shè)定溫度時(shí)，在顯示屏的左下角有一長(zhǎng)形的指示燈閃亮，直到高壓時(shí)間結(jié)束后指示燈滅，此時(shí)蜂鳴器報(bào)警一聲。當(dāng)壓力降至0 MPa時(shí)，蜂鳴器再報(bào)警一聲。溫度降至80℃時(shí)，蜂鳴器報(bào)警10次。顯示屏溫度指示消失，此時(shí)才可打開(kāi)鍋蓋。

⑧關(guān)電源，開(kāi)高壓鍋蓋，取出已滅菌的物品，烘干。

(4)濾過(guò)除菌 用于培養(yǎng)用液和各種不能高壓滅菌的溶液的滅菌。采用金屬濾器和小型的塑料濾器，配上可以更換的微孔濾膜，極大地方便了操作。濾器型號(hào)按直徑大小劃分。如過(guò)濾量大的培養(yǎng)用液常用較大型號(hào)的金屬濾器(直徑90 mm、100 mm、142 mm……等)，配以過(guò)濾泵使用。過(guò)濾量較小的液體常用注射器推動(dòng)的塑料小濾器(直徑20 mm、25 mm等)。濾膜孔徑有0.60 μm、0.45 μm、0.35 μm、0.22 μm、0.10μm等，以0.22 μm除菌zui為保險(xiǎn)，但對(duì)于較粘稠難濾過(guò)的液體，仍需選用孔徑較大的濾膜。

①在過(guò)濾器上裝上微孔濾膜，孔徑為0.22μm。

②轉(zhuǎn)化細(xì)胞用布包好，濕熱滅菌后使用。