骨髓瘤細(xì)胞懸液的制備方法分析

zui常用的干細(xì)胞系為SP2/0和NS-1，均來自BALB/c小鼠骨髓瘤。一般在準(zhǔn)備融合前的兩周就應(yīng)開始復(fù)蘇骨髓瘤細(xì)胞，為確保該細(xì)胞對HAT的敏感性，每3～6個月應(yīng)用8-氮雜鳥嘌呤篩選一次，以防止細(xì)胞的突變。骨髓瘤細(xì)胞懸液的制備方法如下：
1．將剛復(fù)蘇的瘤細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中，5% C02,37℃溫箱孵育。每2～3天換液一次，3～5天傳代一次，待細(xì)胞生長穩(wěn)定后方可供細(xì)胞融合用。于融合前48～36小時，將骨髓細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)（一般按一塊96孔板的融合試驗需2～3瓶100m1培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)備）。
2．融合當(dāng)天，用彎頭滴管將細(xì)胞從瓶壁上輕輕吹下，收集于50m1離心管或融合管內(nèi)。
3. 1000r/min離心5～10分鐘，棄去上清液。
4．加入30m1不*培養(yǎng)基，同法離心洗滌一次。然后將細(xì)胞重懸浮于lOml不*培養(yǎng)基，混勻。
5．取骨髓瘤細(xì)胞懸液在倒置顯微鏡下觀察，生長良好的細(xì)胞明亮呈圓形，排列整齊，形態(tài)完整，密度適宜(0.1x106～1x106/ml)。經(jīng)錐蟲藍(lán)染色，活干細(xì)胞數(shù)應(yīng)大于90%。

人星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HA miRNA    規(guī)格:    1 µg
人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HA-c miRNA    規(guī)格:    1 µg
人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HA-sp miRNA    規(guī)格:    1 µg
人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HA-h miRNA    規(guī)格:    1 µg
人小膠質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HM miRNA    規(guī)格:    1 µg
人微血管內(nèi)皮細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HDMEC miRNA    規(guī)格:    1 µg
人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HDLEC miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮角質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HEK miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮角質(zhì)細(xì)胞-成人微小RNA    英文名稱：    HEK-a miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮黑色素細(xì)胞-淺色素微小RNA    英文名稱：    HEM-l miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮黑色素細(xì)胞-中色素微小RNA    英文名稱：    HEM-m miRNA    規(guī)格:    1 µg
人表皮黑色素細(xì)胞-深色素微小RNA    英文名稱：    HEM-d miRNA    規(guī)格:    1 µg
人成纖維細(xì)胞-胎兒微小RNA    英文名稱：    HEF-f miRNA    規(guī)格:    1 µg
人成纖維細(xì)胞-新生兒微小RNA    英文名稱：    HEF-n miRNA    規(guī)格:    1 µg
人成纖維細(xì)胞-成人微小RNA    英文名稱：    HEF-a miRNA    規(guī)格:    1 µg
人毛乳頭細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HHDPC miRNA    規(guī)格:    1 µg
人生發(fā)基質(zhì)細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HHGMC miRNA    規(guī)格:    1 µg
人毛囊外根殼細(xì)胞微小RNA    英文名稱：    HHORSC miRNA    干細(xì)胞規(guī)格:    1 µg