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技術(shù)文章

ATCC細(xì)胞獲得無(wú)限表達(dá)所需是試劑

閱讀:125          發(fā)布時(shí)間:2018-3-6

(1)ATCC細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá):通??梢允沟鞍自诩?xì)胞中暫時(shí)表達(dá)數(shù)天到數(shù)周。瞬時(shí)表達(dá)常用于驗(yàn)證cDNA是否能夠指導(dǎo)蛋白的合成,比較表達(dá)同一蛋白的不同載體的有效性,在進(jìn)行建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系之前,通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)來(lái)驗(yàn)證重組表達(dá)載體的正確性是十分必要的。然而,瞬時(shí)表達(dá)難以按比例產(chǎn)生大量蛋白質(zhì)(>1mg),此外,整個(gè)細(xì)胞群體中只有部分細(xì)胞暫時(shí)得到蛋白表達(dá),不利于細(xì)胞表型的研究。

(2)穩(wěn)定表達(dá):通過(guò)利用共轉(zhuǎn)染的標(biāo)記篩選系統(tǒng),如G418等,對(duì)DNA轉(zhuǎn)染后的哺乳動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行選擇,使質(zhì)粒DNA穩(wěn)定整合到宿主細(xì)胞染色體上,則可以獲得無(wú)限表達(dá)所需蛋白的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。

(3)誘導(dǎo)表達(dá):可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)使外源基因的表達(dá)受誘導(dǎo)刺激強(qiáng)度控制,避免持續(xù)穩(wěn)定表達(dá)某些蛋白帶來(lái)的細(xì)胞毒性,zui常用的是四環(huán)素(tetracyrcline,tet)調(diào)控的可誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng),具有嚴(yán)密、、可控制性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。該系統(tǒng)由調(diào)節(jié)質(zhì)粒和反應(yīng)質(zhì)粒組成,有兩種調(diào)節(jié)方式:①tet-off,四環(huán)素存在時(shí)外源基因表達(dá)受抑制,而去除四環(huán)素后誘導(dǎo)基因表達(dá);②tet-on則相反,培養(yǎng)基中有四環(huán)素時(shí)表達(dá)外源基因,無(wú)四環(huán)素時(shí)基因表達(dá)受抑制。tet-on系統(tǒng)更容易操作,避免誘導(dǎo)蛋白時(shí)清洗四環(huán)素的步驟,由于普通血清含有四環(huán)素而容易誘導(dǎo)不必要的蛋白表達(dá),因此tet-on細(xì)胞需要在無(wú)四環(huán)素的血清中培養(yǎng)。

除了質(zhì)粒表達(dá)載體以外,病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移也是將外源DNA引入不同類型細(xì)胞的有效而方便的方法,痘苗病毒是常用系統(tǒng)之一。痘苗病毒載體中必須表達(dá)cDNA而不是基因組克隆,病毒在感染后6小時(shí)開(kāi)始形成,一直持續(xù)2天。痘苗病毒表達(dá)系統(tǒng)能表達(dá)多個(gè)蛋白或表達(dá)多亞基酶的幾個(gè)亞基,例如,ATCC細(xì)胞含有不同cDNA的DTM-1載體可以共轉(zhuǎn)染到表達(dá)噬菌體T7聚合酶的細(xì)胞中以研究多種蛋白的表達(dá),對(duì)研究多亞基蛋白復(fù)合物的組織尤其有用。
對(duì)照品    磺胺嘧啶    100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    炔諾孕酮    100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    甲萘醌    50mg    對(duì)照品
對(duì)照品    甲巰咪唑    100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    甲氧芐啶    100mg    對(duì)照品
對(duì)照品    己酸羥孕酮    50mg    對(duì)照品
對(duì)照品    己烯雌酚    50mg    對(duì)照品
ATCC細(xì)胞

 

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