ATCC細胞凍存及復蘇的基本原則

ATCC細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。
    細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術(shù)手段。在細胞建株和建系中，及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中，雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是*的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候，細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導致實驗失敗，如果沒有原始細胞的凍存，則因為上述的意外而前功盡棄。
1、常用凍存液組成成分
20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止細胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?br />2、DMSO在凍存液中的作用
DMSO在4℃時對細胞無明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過細胞膜，降低細胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使ATCC細胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲，避免了細胞過分脫水皺縮；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點下降，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷。
3、注意事項     
  1.DMSO 不用高壓滅菌；DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過濾除菌。
  2.DMSO要用新的，而且要避光保存。
  3.DMSO：含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。

 新型血管活性因子UCN(小鼠、大鼠)IgG 大鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)

 新型抑癌基因/一種新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因IgG 大鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)

 新型抑癌基因IgG 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9) 

 新型抑癌基因IgG 大鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)

 信號調(diào)節(jié)蛋白αIgG 大鼠骨粘連蛋白(ON)

 信號通路WNT10AIgG 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)

 信號通路WNT10BIgG 大鼠骨形成蛋白(BMPs)

 信號通路Wnt1IgG 大鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)

 信號通路Wnt2BIgG 大鼠骨橋素(OPN)

 信號通路Wnt3aIgG 大鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)

 信號通路WntIgG 大鼠骨堿性磷酸酶(BALP)
ATCC細胞