一種新型活細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用

蛋白質(zhì)是細(xì)胞活性及功能的zui終執(zhí)行者，蛋白質(zhì)之間復(fù)雜的相互作用決定著生物體的復(fù)雜程度。機(jī)體細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)之間相互交叉作用可以從分子水平揭示蛋白質(zhì)的功能，而且對(duì)于提示生長(zhǎng)、發(fā)育、分化、凋亡以及理解生物調(diào)控機(jī)制等生命活動(dòng)規(guī)律至關(guān)重要，為探討重大疾病的機(jī)制、疾病治療、疾病預(yù)防和新藥開發(fā)提供了重要的理論基礎(chǔ)。因此，了解、闡明蛋白質(zhì)之間相互作用的機(jī)制意義重大，是后基因組時(shí)代生命科學(xué)與其他學(xué)科交叉研究的熱點(diǎn)。熒光蛋白憑借其快捷靈敏、即時(shí)檢測(cè)和無需破壞活細(xì)胞的特點(diǎn)，在此領(lǐng)域也受到熱捧。

據(jù)報(bào)道，熒光蛋白是目前細(xì)胞分子生物學(xué)廣泛應(yīng)用的分子探針，在細(xì)胞生物學(xué)、組織工程、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域也有廣泛應(yīng)用。熒光蛋白以其可以在活細(xì)胞正常生理水平下即時(shí)反應(yīng)細(xì)胞、生物大分子和蛋白質(zhì)相互作用的特點(diǎn)大大推進(jìn)了活細(xì)胞內(nèi)的分子探針技術(shù)的發(fā)展。例如，從發(fā)光水母Aquoria victoria中分離的綠色熒光蛋白(GFP)和來源于珊瑚Discosoma sp的紅色熒光蛋白(DsRed，RFP)是兩種廣泛使用的熒光蛋白。

研究人員以綠色熒光蛋白(GFP)和紅色熒光蛋白(RFP)為材料，通過基因工程的方法將RFP和GFP的N末端和C末端插入特異的定位信號(hào)，使得兩種熒光蛋白單獨(dú)表達(dá)(或連接無相互作用的蛋白對(duì))時(shí)，在細(xì)胞內(nèi)的空間位置上分離。當(dāng)待測(cè)蛋白A和B無直接相互作用時(shí)，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)不會(huì)結(jié)合或者相互接近，檢測(cè)系統(tǒng)的綠色熒光和紅色熒光將會(huì)分別在細(xì)胞的核外和核內(nèi)表達(dá);當(dāng)待測(cè)蛋白A和蛋白B具有直接的相互作用時(shí)，它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)會(huì)相互結(jié)合或者相互接近，兩種熒光在核內(nèi)會(huì)產(chǎn)生共定位的現(xiàn)象。這種新型檢測(cè)系統(tǒng)采用經(jīng)典的抗凋亡蛋白Bcl-2和Bak-BH3短肽作為蛋白對(duì)測(cè)試系統(tǒng)，共定位現(xiàn)象明顯，系統(tǒng)靈敏可靠。