細胞的常規(guī)保存方法

在生化科研的過程中，使用標準受體干細胞系（如：大腸桿菌、酵母菌、CHO細胞系等等）進行研究已經(jīng)是非常常規(guī)的手段。在使用各種細胞進行實驗的時候，保存細胞樣本就成了*的一步。一般來說保存細胞是為了能夠再次使用，所以使用什么方法保存、能保存多長時間也就至關(guān)重要。當再次使用自己保存的細胞時，我們肯定不想發(fā)現(xiàn)長滿雜菌的樣本，或是都死了的樣本、亦或者蛋白表達不出來的樣本。那今天就來說說常見的一些保存細菌細胞樣本的方法和時限。
幾種保存方法
一個zui基本的概念：保存溫度越低，保存時限更長；溫度越低，對細胞傷害越大；低溫也不怕，我有防凍劑（e.g.甘油）。下面的表格就是五種常見保存細菌細胞的方法和大約時限。
保存條件    溫度°C    大約時間
瓊脂平板            4             4-6周
    （AgarPlate）                                                                                
穿刺培養(yǎng)基         4            3周-1年                                                         
（stabculture）                                                                            
 冰凍                  -20         1-3年                                                            
超低溫冰凍       -20         1-10年                                                    
凍干                   ≤4         15年+                               
    但是，具體到你用的那一種菌用什么方法保存能夠保存多長時間，就要視情況而定了，并沒有一個*答案，上表中所列出來的時限一般來說是適用大部分細菌樣本的。小編如果要保存一個細胞樣本，一般不會費時費力來查這個表的，那怎么辦？問師兄，找?guī)熃憧﹡
短期保存
上表中的瓊脂平板和穿刺培養(yǎng)基都適合于短期保存。這兩種方法都保存在4度冰箱，為避免雜菌，用塑料或封口膜（parafilm）對平板或培養(yǎng)瓶進行封口，這樣可以拒絕冰箱內(nèi)本身存在的雜菌、霉菌入侵樣本，也可以防止自己的培養(yǎng)基過快失水而變得干燥。小編就曾有一盤放在4度冰箱的菌落樣本，忘記了封口，一個月后，干細胞菌落和瓊脂都變成了木乃伊T_T
長期保存
長期低溫冰凍必然會導(dǎo)致部分細胞死亡，而且很多時候我們要把細胞樣本拿來重新接種做實驗，所以解凍再凍的過程也會導(dǎo)致細胞死亡。那么起始樣本的細胞濃度就要達到一定的高度，這樣在以后保存的過程中就算死亡一些細胞，我們也還有很多有效細胞可以用，一般來說這個起始細胞密度要達到10的七次方的樣子（單位：細胞/mL）。
除了常見抗凍劑甘油外，我們也會添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白質(zhì)用來吸附在細胞表面形成保護薄膜，防止在冷凍過程中對細胞的破壞。
另外在解凍細胞樣本的時候，在低溫條件下，不要讓整個細胞樣本解凍成液體，只要解凍到少量液態(tài)樣本出現(xiàn)就好。這樣也可以幫助更多的樣本存活過一次解-再凍的過程，方便下次或多次使用。
關(guān)于凍干保存，其實并不是所有的細菌都適合凍干，有的細菌沒法在凍干過程中存活。所以如果你實在需要超長時間保存（超過十年）你的樣本，一定要自己驗證一次，看凍干細胞再培養(yǎng)能不能成功