腫瘤細胞消化法原代培養(yǎng)

Wistar大鼠處死，腫瘤細胞迅速取出胸主動脈，浸泡在含無菌PBS的表面皿中，轉移到無菌超凈臺。在表面皿中漂洗主動脈去除殘留的血跡，縱向剪開主動脈，把主動脈鋪平并使內膜朝上，用鑷子來回刮除內膜層，剝離血管中膜。將剝離的血管中膜用眼科剪剪碎，碎片大小在1 mm×1 mm左右。裝入含0.25%胰酶的玻璃培養(yǎng)瓶中于37℃條件下消化。當在顯微鏡下觀察組織塊表面出現(xiàn)大量細胞時應立即加入血清終止消化，一般消化的時間在 3.5 h。終止消化后將玻璃培養(yǎng)瓶置于37℃空氣搖床振搖10 min，繼續(xù)用吹打的方法使組織塊表面的細胞盡可能脫落。待細胞從組織塊脫離后，120目細胞篩過濾，轉入離心管內離心，棄上清，用含20%小牛血清的 DMEM培養(yǎng)基吹打細胞，zui后接種于25 mL培養(yǎng)瓶，放入CO2孵箱培養(yǎng)，48 h后換液。
細胞融合后，倒去舊的培養(yǎng)液，加入適量的0.25%胰酶，顯微鏡下觀察，見細胞收縮后去除消化液，加入適量培養(yǎng)液，吹打細胞，以1∶2接種于新培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)液，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。傳代細胞從第三代開始可換用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。VSMC 至少可以傳16代以上，并且從第二代開始平滑肌細胞即可凍存。
相差顯微鏡下，腫瘤細胞未匯合之前多數(shù)呈梭形，至匯合后，部分區(qū)域細胞束狀排列，呈典型的“峰和谷”狀態(tài)。將傳代獲得的平滑肌細胞接種于蓋玻片上，3~4天后至亞匯合狀態(tài)，取出細胞爬片，PBS清洗后用4℃純丙酮固定15~30 min，自然晾干。采用小鼠抗大鼠α-肌動蛋白抗體免疫組織化學染色鑒定VSMC肌動蛋白。根據(jù)S-P免疫組織化學染色的常規(guī)方法，以平滑肌細胞胞漿棕黃色為陽性結果。
400mg    Mitoxantrone Hydrochloride     70476-82-3     鹽酸米托蒽醌標準品
400mg    Meloxicam     71125-38-7     美洛昔康標準品
400mg    Mafenide Acetate    13009-99-9     醋酸磺胺米隆標準品
400mg    Levocarnitine     541-15-1     左卡尼汀標準品
400mg    Ioxilan    107793-72-6     碘昔蘭標準品
400mg    Iopromide     73334-07-3     碘普羅胺標準品
400mg    Etodolac    41340-25-4    依托度酸標準品
400mg    Cloprostenol Sodium    55028-72-3    氯前列烯醇鈉標準品
400mg    Climbazole    38083-17-9    苯咪丁酮標準品
400mg    Ciprofloxacin Hydrochloride    86393-32-0    鹽酸環(huán)丙沙星標準品
腫瘤細胞