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轉(zhuǎn)化細(xì)胞鋪勻的技巧
閱讀:265 發(fā)布時(shí)間:2018-4-16做轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn),細(xì)胞鋪板大概是zui常見的一個(gè)實(shí)驗(yàn)了。但是有很多人不是很得要領(lǐng),鋪得不是均勻:要么中間密周圍稀,要么周圍密中間禿頂。以下是我的一些技巧,希望可以幫助到大家。
1.一般96孔板我每孔是加100微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入,加完半邊板后,將未加的細(xì)胞懸液混一下再,繼續(xù)加剩余的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度(我一般輕巧敲三下),太強(qiáng)或次數(shù)太多會導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),依次敲擊剩余三個(gè)邊,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱。
6孔板12孔板或24孔板,我均采用將*個(gè)孔加入少量無血清培養(yǎng)基,晃動浸潤整個(gè)孔底,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤孔底,其它孔一次類推,這樣整個(gè)孔底都是濕潤的,細(xì)胞懸液會平鋪在整個(gè)孔底,加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間中間細(xì)胞多,而加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,細(xì)胞分散較均勻,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺靜置一下。這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢,但操作熟練了也不慢。也可以采用輕拍的方式,但力度沒有96孔板好掌握,效果沒有96孔板好,所以我放棄改用浸潤孔底的方法。
2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,對著燈光,從底部往上看,看細(xì)胞有沒有抱團(tuán)。然后從底部敲擊,使之分散。
3.如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,我建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,效果不錯,就是振幅小,頻率高的那種。
4.轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞要盡量打散,大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后,要充分懸浮!還有轉(zhuǎn)移到六孔板后,是要晃得!晃的時(shí)候不要讓那個(gè)細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,不然細(xì)胞就全被帶到中間去了,就會不均勻!
100215-200601 檢查用 100mg 乙羥茶堿
100216-200702 含量測定 100mg 鹽酸安他唑啉
100218-199601 含量測定 50mg 鹽酸美西律
100219-199902 含量測定 50mg 鹽酸酚芐明
100222-200702 鑒別 50mg 鹽酸羅通定
100223-200102 含量測定 50mg 鹽酸維拉帕米
100224-200903 含量測定 100mg 異維A酸
100225-200502 含量測定 100mg 貝諾酯
100226-200404 含量測定 50mg 半乳糖
100227-201001 供UV法含量測定 30mg 醋酸去氧皮質(zhì)酮
100228-199802 含量測定 50mg 醋酸甲萘氫醌
100229-200803 HPLC法含量測定 100mg 富馬酸氯馬斯汀
轉(zhuǎn)化細(xì)胞