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轉(zhuǎn)化細(xì)胞常用純化方法
閱讀:71 發(fā)布時(shí)間:2017-9-8 轉(zhuǎn)化細(xì)胞人工純化是利用人為手段造成對(duì)某一細(xì)胞生長(zhǎng)有利的環(huán)境條件,抑制其他細(xì)胞的生長(zhǎng)從而達(dá)到純化細(xì)胞的目的。
1、細(xì)胞時(shí)間差酶消化法:
酶消化法是比較常用的純化方法,不僅對(duì)貼壁細(xì)胞可行,能利用上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞對(duì)胰蛋白酶的耐受性不同,是兩者分開(kāi),達(dá)到純化的目的;另外對(duì)貼壁細(xì)胞與半貼壁細(xì)胞及黏附細(xì)胞間的分離純化也是十分有效的。
兩者在胰蛋白酶的作用下,由于成纖維細(xì)胞先脫壁,而上皮細(xì)胞要消化相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間才脫壁,特別是在原代細(xì)胞初次傳代和早期傳代中兩種差別尤為明顯,故可采用多次差別消化方法將上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分開(kāi),方法步驟如下:
采用常規(guī)消化傳代方式將0.25%胰蛋白酶注入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)兩次,每次加1ml(25ml培養(yǎng)瓶),來(lái)回輕搖1-2次,使胰蛋白酶流過(guò)所有細(xì)胞表面,然后倒掉。
蓋好瓶塞,將培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下觀(guān)察,發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞變園,部分脫落,立即加入2ml有血清的培養(yǎng)基終止消化。
用彎頭吸管輕輕吹打成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)區(qū)域(可事先在鏡下用記號(hào)筆在培養(yǎng)瓶上劃出記號(hào))。吹打時(shí)不要用力,也不要吹打上皮細(xì)胞生長(zhǎng)區(qū)域。吹打結(jié)束后,再用少量培養(yǎng)基漂洗一遍,然后加入適量培養(yǎng)基于瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng),也可重復(fù)上述操作再進(jìn)行一次。
隔幾日后或下次傳代時(shí),再進(jìn)行上述操作,進(jìn)過(guò)幾次處理,就可將成纖維細(xì)胞去除或者將兩者分開(kāi)。
2、細(xì)胞培養(yǎng)機(jī)械刮除法:
原代培養(yǎng)時(shí),如果上皮轉(zhuǎn)化細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分為區(qū)成混雜生長(zhǎng),每種細(xì)胞都以小片或區(qū)域性分布的方式生長(zhǎng)在瓶壁上??刹捎脵C(jī)械的方法去除不需要的細(xì)胞區(qū)域而保留需要的細(xì)胞區(qū)域,其方法步驟如下 :
將要純化細(xì)胞的培養(yǎng)瓶,在凈化室內(nèi)放在倒置顯微鏡監(jiān)視下進(jìn)行操作。
用硅橡膠刮子在不需要生長(zhǎng)的細(xì)胞區(qū)域推劃,使細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中,注意不要傷及所需細(xì)胞。
推劃后用培養(yǎng)基沖洗振搖兩次倒掉,即可將培養(yǎng)基加入原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
數(shù)日后如發(fā)現(xiàn)不需要的細(xì)胞又長(zhǎng)出,可再進(jìn)行上述操作,這樣反復(fù)多次可以純化細(xì)胞。操作過(guò)程中要嚴(yán)格無(wú)菌操作,防止污染。
≥98% 規(guī)格: *: Curcumol 莪術(shù)醇
≥98% 規(guī)格: *: (+)-Catechin 兒茶素
≥96% 規(guī)格: *: Dihydrotanshinone I 二氫丹參酮 I
≥95% 規(guī)格: *: Dihydrocapsaicin 二氫辣椒堿
≥99% 規(guī)格: *: Dihidromethysticin 二氫麻醉椒苦素
≥97% 規(guī)格: *: Columbianadin 二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯
≥98% 規(guī)格: *: Dihydrolycorine 二氫石蒜堿
轉(zhuǎn)化細(xì)胞