ATCC細(xì)胞毒試驗(yàn)實(shí)在組織培養(yǎng)中研究淋巴細(xì)胞、抗體或抗體依賴性淋巴細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的一種技術(shù),也是在體外研究特異性細(xì)胞免疫比較可靠和靈敏的方法,目前微量細(xì)胞毒試驗(yàn)是應(yīng)用zui廣的一種方法.
（一）淋巴細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒試驗(yàn)方法： 1) 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)物制成懸液,并稀釋至需要的細(xì)胞濃度. 2) 于微量試驗(yàn)班的小孔內(nèi)分別接種0.2ml腫瘤細(xì)胞（內(nèi)含5×102）個(gè)細(xì)胞,37℃培育24h. 3) 細(xì)胞貼壁后,輕輕輕去培養(yǎng)基,加1mlPBS洗滌,輕去洗滌液及未貼壁細(xì)胞. 4) 向小孔分別加入0.2ml不同濃度的淋巴細(xì)胞（分別含有5×105個(gè)細(xì)胞,5×104個(gè)細(xì)胞,5×103個(gè)細(xì)胞）,使淋巴細(xì)胞與癌細(xì)胞之比依次為1000：1、100：1、10：1. 5) 45min后加0.1ml5%胎牛血清,37℃繼續(xù)培養(yǎng)2-3天. 6) 2%臺(tái)盼藍(lán)染色,翻轉(zhuǎn)微量試驗(yàn)班,計(jì)數(shù)活存的腫瘤細(xì)胞,并設(shè)正常人淋巴細(xì)胞代替腫瘤患者淋巴細(xì)胞作對(duì)照,每份需同時(shí)做3個(gè)復(fù)孔,分別檢查各孔中存活活細(xì)胞數(shù),按下列公式計(jì)算細(xì)胞毒率,并做t檢驗(yàn).
（二） 抗體加補(bǔ)體的細(xì)胞毒試驗(yàn)方法： 此法是組織相容性抗原（HLA）檢查技術(shù)中zui常用的一種方法.也稱微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn).人體的組織相容性抗原存在于淋巴細(xì)胞膜的表面,從供者與受者的血液分離淋巴細(xì)胞作為靶細(xì)胞,以各種定型單價(jià)抗血清與家兔血清補(bǔ)體作為效應(yīng)系統(tǒng).如果淋巴細(xì)胞表面具有與抗血清相對(duì)應(yīng)的抗原,則淋巴細(xì)胞就會(huì)受損傷或致死而被臺(tái)盼藍(lán)染色. 1、 材料： a.淋巴細(xì)胞 b. 血清.小牛血清（56℃滅活30min） c.待測(cè)血清.收集多產(chǎn)婦分娩時(shí)的胎盤剝離后的血,分出血清,疊氮納防腐,4℃保存. d.已知陽(yáng)性對(duì)照血清.用上海市中心血站制備的馬抗人淋巴細(xì)胞血清（ALS）,同時(shí)做1：3稀釋. e.補(bǔ)體.新鮮家兔混合血清,分裝小試管,保存于-20℃. 2、 操作步驟： a.在塑料試驗(yàn)盒內(nèi)加入醫(yī)用液體石蠟油20ml,放進(jìn)一塊52孔微量玻璃試驗(yàn)班,使板沉至盒底. b.用0.25ml的微量定量加液器分別加入待測(cè)血清和陽(yáng)性對(duì)照血清2-2ul/孔,陰性對(duì)照用Hanks液代之.加樣針尖應(yīng)磨平. c.用同法每孔內(nèi)加入待測(cè)的淋巴細(xì)胞2-3ul,ATCC細(xì)胞應(yīng)先加陰性對(duì)照和補(bǔ)體對(duì)照孔,然后加待測(cè)孔,zui后加陽(yáng)性血清對(duì)照孔,加后輕搖使其混勻,置室溫作用1h. d.每孔加入兔補(bǔ)體5-7ul（按加淋巴細(xì)胞順序加入）,置37℃培育45min（或室溫作用1h）. e.每孔加入2%臺(tái)盼藍(lán)等滲液3-5ul室溫中靜置20min,吸去藍(lán)色上清. f.普通顯微鏡檢查,記錄每孔中死細(xì)胞（著色細(xì)胞）數(shù). 死細(xì)胞.體積稍大,著藍(lán)色,無(wú)折光性. 活細(xì)胞.大小正常,未著色,較透亮. 判斷標(biāo)準(zhǔn)（每次實(shí)驗(yàn),需做3-6個(gè)復(fù)本）. 其中著色細(xì)胞：《=20%為陰性, 20%--50%為弱陽(yáng)性, 50%--70%為陽(yáng)性, 》=70%為強(qiáng)陽(yáng)性.
4'-Cyanobenzylidene-4-ethoxyaniline    CAS號(hào)：    34128-02-4    質(zhì)量規(guī)格：    4'-氰苯亞甲基-4-乙氧苯胺(>98.0%(T))    英文名稱：    >98.0%(T)    
4-Cyanobiphenyl    CAS號(hào)：    2920-38-9    質(zhì)量規(guī)格：    4-氰基聯(lián)苯(>97.0%(GC))    英文名稱：    >97.0%(GC)    
4-Cyanophenyl 4-(3-Butenyloxy)benzoate    CAS號(hào)：    114482-57-4    質(zhì)量規(guī)格：    4-(3-丁烯氧基)苯甲酸4-氰苯基酯(>97.0%(GC))    英文名稱：    >97.0%(GC)    
4-Cyanophenyl 4-Heptylbenzoate    CAS號(hào)：    38690-76-5    質(zhì)量規(guī)格：    4-庚基苯甲酸-4-氰基苯酯(>98.0%(GC))    英文名稱：    >98.0%(GC)    
4-Decyloxybenzaldehyde    CAS號(hào)：    24083-16-7    質(zhì)量規(guī)格：    4-癸氧基苯甲醛(>97.0%(GC))    英文名稱：    >97.0%(GC)    
4'-Decyloxybiphenyl-4-carboxylic Acid    CAS號(hào)：    69367-32-4    質(zhì)量規(guī)格：    4'-癸氧基聯(lián)苯-4-羧酸(>98.0%(T))    英文名稱：    >98.0%(T)    
4'-Demethylepipodophyllotoxin    CAS號(hào)：    6559-91-7    質(zhì)量規(guī)格：    4'-去甲氧基表鬼臼毒素（標(biāo)準(zhǔn)品）    英文名稱：    HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 
ATCC細(xì)胞