人胚腎二倍體細胞；HEK-2圖片

人胚腎二倍體細胞；HEK-2圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人胚腎二倍體細胞；HEK-2圖片
形態(tài)特性  上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞系來自一女性胎兒的正常腎組織。中國科學院昆明細胞庫于1986年建立。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)   10%FBS
傳代方法  1:2傳代；3-4天一次
傳代情況 P4
凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

OPD 干粉    25g
Origami B 菌種    1mL
Origami B(DE3) 菌種    1mL
Origami B(DE3)plysS 感受態(tài)細胞     0.1mL×10
Origami(DE3) 感受態(tài)細胞    0.1mL×10
Origami(DE3) 菌種    1mL
Origami(DE3)plysS 菌種    1mL
OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細胞    10×100μL
Orth 固定液    250 mL
P- 硝基苯基磷酸膽堿    100mg
p19miRNA 檢測試劑盒     50 次
p19siRNA 結(jié)合蛋白     1000U
Paclitaxel(TAXOL)( 紫杉 )    100μL
PAGE 膠長加樣槍頭    1盒
PBS 緩沖液 ,10×    250mL
PCNA 小鼠單抗    100 μLCiticoline （sodium salt） （100 mg）P’-[2-（trimethylammonio）ethyl] ester-cytidine 5’-（trihydrogen diphosphate）-inner， monosodium salt； Cytidine 5’-diphosphocholine|Flussorex|Gerolin|Logan|Neurotron|Sinkron； Citicoline （sodium salt）
D-Luciferin （sodium salt） （50 mg）4，5-dihydro-2-（6-hydroxy-2-benzothiazolyl）-4S-thiazolecarboxylic acid， monosodium salt； D-Luciferin （sodium salt）
CAY10677 （10 mg）5-（2-amino-5-pyrimidinyl）-N，N-diethyl-1-octyl-1H-indole-3-methanamine； Icmt Inhibitor 15； CAY10677
R-848 （50 mg）4-amino-2-（ethoxymethyl）-α，α-dimethyl-1H-imidazo[4，5-c]quinoline-1-ethanol； Resiquimod|S 28463； R-848
Aprepitant （10 mg）5-[[（2R，3S）-2-[（1R）-1-[3，5-bis（trifluoromethyl）phenyl]ethoxy]-3-（4-fluorophenyl）-4-morpholinyl]methyl]-1，2-dihydro-3H-1，2，4-triazol-3-one； Emend|L-754，030|MK 869|ONO-7436； Aprepitant
MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC （1 mg）N-（4-methoxy-1，4-dioxobutyl）-L-alanyl-L-alanyl-L-prolyl-N-（4-methyl-2-oxo-2H-1-benzopyran-7-yl）-L-valinamide； I 1270|MeOSuc-AAPV-AMC|Methoxy Succinyl-Ala-Ala-Pro-Val-AMC； MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC
Furin Inhibitor I （500 ug）N2-（1-oxodecyl）-L-arginyl-L-valyl-N-[（1S）-4-[（aminoiminomethyl）amino]-1-（2-chloroacetyl）butyl]-L-lysinamide； Decanoyl-Arg-Val-Lys-Arg-CMK； Furin Inhibitor I
β-Lapachone （25 mg）3，4-dihydro-2，2-dimethyl-2H-naphtho[1，2-b]pyran-5，6-dione； NSC 26326|SL 11001|ARQ 501|NSC 629749； β-Lapachone
PCNA 小鼠單抗    1000 μL
PCR Mix 染料    10mL
PCR 法 DNA 探針標記試劑盒    5次
PCR 法 DNA 探針地高標記試劑盒    5次