EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KM9801圖片

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KM9801圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞；KM9801圖片
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細(xì)胞來源于一正常男性的外周血。1998年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫通過EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  15%NBS
傳代方法  1:2傳代；5-6天一次
傳代情況 P4
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

制霉菌素溶液 ,2mg/mL    10mL
質(zhì)粒 ( 載體 ) 系列產(chǎn)品    2μg
質(zhì)粒（載體）列表    2 μg
質(zhì)譜兼容型蛋白銀染試劑盒    10 次
中 pH 緩沖液套裝    30 次
中草藥 DNAout    100 次
中草藥 DNAout    20 次
中提柱式 BAC DNAout    5次
中性蛋白酶    10mg
中性紅    5g
中性親和素蛋白    10mg
終點顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒    32 次
重蒸酚    100mL
重蒸酚    250mL
重組蛋白 A    1mg
重組蛋白 A/G    1mgJWH 146 （5 mg）（1-heptyl-5-phenyl-1H-pyrrol-3-yl）-1-naphthalenyl-methanone； JWH 146
Gatifloxacin （5 g）1-cyclopropyl-6-fluoro-1，4-dihydro-8-methoxy-7-（3-methyl-1-piperazinyl）-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid； AM 1155|BMS 206584-01|PD 135432； Gatifloxacin
JWH 081 N-（4-hydroxypentyl） metabolite （5 mg）（1-（4-hydroxypentyl）-1H-indol-3-yl）（4-methoxynaphthalen-1-yl）methanone； JWH 081 N-（4-hydroxypentyl） metabolite
5-（N-ethyl-N-isopropyl）-Amiloride （25 mg）3-amino-N-（aminoiminomethyl）-6-chloro-5-[ethyl（1-methylethyl）amino]-2-pyrazinecarboxamide； EPIA|L-593，754|MH 12-43； 5-（N-ethyl-N-isopropyl）-Amiloride
PJ-34 （hydrochloride） （25 mg）N-（5，6-dihydro-6-oxo-2-phenanthridinyl）-2-（dimethylamino）-acetamide， monohydrochloride； PJ-34 （hydrochloride）
JNJ-1661010 （5 mg）N-phenyl-4-（3-phenyl-1，2，4-thiadiazol-5-yl）-1-piperazinecarboxamide； JNJ-1661010
PPADS （sodium salt） （250 mg）4-[2-[4-formyl-5-hydroxy-6-methyl-3-[（phosphonooxy）methyl]-2-pyridinyl]diazenyl]-1，3-benzenedisulfonic acid， tetrasodium salt； Pyridoxalphosphate-6-azophenyl-2’，4’-disulfonic acid； PPADS （sodium salt）
Riluzole （hydrochloride） （10 mg）6-（trifluoromethoxy）-2-benzothiazolamine， monohydrochloride； PK 26124； Riluzole （hydrochloride）
DBZ （10 mg）N-[（1S）-2-[[（7S）-6，7-dihydro-5-methyl-6-oxo-5H-dibenz[b，d]azepin-7-yl]amino]-1-methyl-2-oxoethyl]-3，5-difluoro-benzeneacetamide； Dibenzazepine； DBZ
D-Luciferin （potassium salt） （500 mg）4，5-dihydro-2-（6-hydroxy-2-benzothiazolyl）-4S-thiazolecarboxylic acid， monopotassium salt； D-Luciferin （potassium salt）
Costunolide （25 mg）3aS，4，5，8，9，11aR-hexahydro-6E，10E-dimethyl-3-methylene-cyclodeca[b]furan-2（3H）-one； Costus lactone|Melampolide|NSC 106404； Costunolide
重組蛋白 G    1mg
重組蛋白 L    1mg
重組蛋白（病毒）系列    --
重組蛋白（非病毒）系列    --