詳細(xì)介紹
人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PC-3M-2B4圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人前列腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PC-3M-2B4圖片
形態(tài)特性 上皮樣;多角
生長特性 貼壁生長
特征特性 母系PC-3M,單細(xì)胞克隆法分離鑒定的低轉(zhuǎn)移亞系;裸鼠體內(nèi)成瘤率87.5%,不轉(zhuǎn)移。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3~1:6傳代;2~3天1次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:11;D13S317:11;D16S539:11,12;D18S51:14,15;D19S433:14;D21S11:29,31.2;D2S1338:18,20;D3S1358:16,20;D5S818:13;D7S820:8,11;D8S1179:13;FGA:24,25;TH01:6,7;TPOX:8,9;vWA:17;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
130868-1二硫鍵異構(gòu)酶,人1mg
130815-250Taq 酶抗體250U
土霉素鹽酸鹽溶液 ,100mg/mL10mL
F12K 液體培養(yǎng)基 ( 無血清和雙抗 )500mL
N,N- 雙 (2- 羥乙基 )-3- 氨基乙磺酸5g
MgSO4溶液,10mM,PCR 5mL
CAS59-05-2氨甲喋呤10mg
131131B-100真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 2100 次
細(xì)菌 RNAout250 次
庚烷磺酸1g
1,4- 雙 (5- 苯基 -2- 噁唑基 ) 苯1g
柱式病毒 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次
CAS39455-31-7DEAE 葡聚糖凝膠 A-5025g
12-242K802 菌種1mL
鹽酸胍溶液,8M200mL
Indo-1 AM1mg
胸嘧啶核苷5gTABERSONINE它勃4429-63-4
10 G METHYL JASMONATEPURE茉莉酸酯39924-52-2
Monoethyl Adipate己二酸單乙酯626-86-8
Dibutyltin maleate二丁基馬來酸錫1978/4/6
DIFORMYLIMIDE SODIUM SALT二酰氨基18197-26-7
5-Bromo-2-fluorobenzonitrile5-溴-2-179897-89-3
Potassium methoxide醇鉀865-33-8
DL-HomoserineDL-高絲氨酸1927-25-9
2-Fluoro-4-nitrotoluene2--4-基1427-07-2
4-NITROPHENYL-N-ACETYL-BETA-D-GLUCOSAMINIDE4-基基-2-乙酰氨基-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖苷3459-18-5
SINIGRIN MONOHYDRATE介子苷64550-88-5
beta-Diphosphopyridine nucleotide煙酰胺腺嘌呤雙核苷酸53-84-9
Cyclobutylamine環(huán)丁基胺2516-34-9
NAtris 乙酸
1-Boc-4-(aminomethyl)piperidine4-氨基基-1-Boc-啶144222-22-0
(5E,9E)-6,10,14-Trimethylpentadeca-5,9,13-trien-2-one法尼基丙1117-52-8
2-Bromo-2-methylpropionic acid2-溴代異丁酸2052/1/9
N-AcetylethylenediamineN-乙酰基乙1001-53-2
Twofold Lactose Bile Salt Broth雙料乳糖膽胨水
CALCIUM PYROPHOSPHATE焦磷酸鈣7790-76-3
CHLOROXURON枯草隆1982-47-4
Abscisic acid脫落酸14375-45-2
CHLOROFORM-D氘代仿-d865-49-6
生物素化的 β- 半乳糖苷酶100U
CAS9025-56-3半纖維素酶15ku
100838-100遺傳霉素 (G418) 干粉100mg