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詳細(xì)介紹
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；MCF7-Cas9-544*操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書(shū)稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周?chē)疂n吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞；MCF7-Cas9-544*現(xiàn)貨直銷(xiāo)，免費(fèi)快遞送貨上門(mén)。公司供應(yīng)各種細(xì)胞株，細(xì)胞系，種類(lèi)齊全，現(xiàn)貨，質(zhì)量保證，公司所有產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)。
| 產(chǎn)品名稱(chēng) | |
| 用途 | 僅用科研 |
| 保存條件 | 4℃保存一年;-20℃長(zhǎng)期保存 |
細(xì)胞名稱(chēng)
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使MCF7細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Puromycin，經(jīng)2ug/ml嘌呤霉素篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS；2ug/ml Puromycin
傳代方法 1:3~1:6傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR Amelogenin：x,x；CSF1PO：10,10；D12S391：18,20；D13S317：11,11；D16S539：11,12；D18S51：14,14；D19S433：13,14；D21S11：30,30；D2S1338：21,23；D3S1358：16,16；D5S818：11,12；D6S1043：12,18；D7S820：8,9；D8S1179：10,14；FGA：23,25；Penta E：7,12；TH01：6,6；TPOX：9,12；vWA：14,15
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
運(yùn)輸保存：
采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時(shí)，若干冰已經(jīng)*融化，請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請(qǐng)按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。
保存條件：4℃保存一年;-20℃長(zhǎng)期保存
用途：只可用于科研。
儲(chǔ)存：液氮。
運(yùn)輸：干冰(第二代培養(yǎng)末期液氮凍存)。
細(xì)胞一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。
注意：*次植入后，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細(xì)胞。到達(dá)客戶手中，出現(xiàn)任何問(wèn)題（人為或者非人為），導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。對(duì)于細(xì)胞的真實(shí)性，支持客戶檢測(cè)對(duì)應(yīng)的biomarker，（如證明細(xì)胞錯(cuò)誤，全額退款。）公司針對(duì)每株細(xì)胞，鑒定gene background，鑒定完成的細(xì)胞可以提供數(shù)據(jù)，用于證明細(xì)胞的真實(shí)性，并且?guī)椭蛻舾嗟牧私饧?xì)胞特性。
12-253Stb13 菌種1mL
一步法大提質(zhì)粒 DNAout5次
肌球蛋白100mg
甲基橙5g
考馬斯亮藍(lán) G-25010g
CAS68-94-0次黃嘌呤1g
80807A-50動(dòng)物細(xì)胞裂解液 A50mL
熒光染色細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒200 次
聚乙烯醇100g
D- 甘露醇250g
TMB 法生物素雜交試劑盒5次
CAS91079-38-8牛肉蛋白胨500g
131122-10考馬斯亮藍(lán) R-25010g
豬膽鹽25g
Lillie 甲醛中性固定液250 mL3-Chloro-2-methylaniline3--2-基胺87-60-5
Phthaloyl amlodipine鄰二酰基氨地平88150-62-3
2-Ami,3,5-triazine2-氨基-1,3,5-三嗪4122/4/7
Z-ASP(OTBU)-OSUN-芐氧羰基-L-天冬氨酸 4-叔丁酯 1-(N-琥珀酰亞胺)酯3338-32-7
N,N,N',N'-Tetramethylchloroformamidinium hexafluorophosphateN,N,N',N'-四基脒六磷酸94790-35-9
TRIMETHYL(PENTAFLUOROPHENYL)SILANE三基五基硅烷1206-46-8
Acorus gramineus, ext.石菖蒲油91745-11-8
6,7,8-TRIMETHOXYCOUMARIN白蠟樹(shù)素6035-49-0
Dihexadecyldimethylammonium bromide雙十六烷基二基溴化銨70755-47-4
TITANIUM OXYSULFATE硫酸氧鈦123334-00-9
FMOC-D-ALA-WANG RESINFMOC-D-ALA-WANG RESIN
N-(tert-Butyldimethylsilyl)-N-methyl-trifluoroacetamideN-(特丁基二基硅)-N-基三乙酰胺77377-52-7
ASTRAGALIN紫云英甙480-10-4
Methyl 1,2,4-triazole-3-carboxylate1,2,4-三氮唑-3-羧酸酯4928-88-5
12-Crown-412-冠-4294-93-9
Zinc nitrate hexahydrate六水酸鋅10196-18-6
2-Sulfobenzoic anhydride2-磺基酸酐1981/8/3
Methyl trifluoromethanesulfonate三烷磺酸酯333-27-7
TRIMYRISTIN甘油三肉豆蔻酸酯555-45-3
1,2-Bis(triethoxysilyl)ethane1,2-二(三乙氧基硅基)乙烷16068-37-4
1-TETRADECANESULFONIC ACID SODIUM SALT十四烷基硫酸6994-45-2
Bispyribac-sodium雙草125401-92-5
Platinum dioxide無(wú)水氧化鉑1314-15-4
Cuprous bromide溴化亞銅7787-70-4
L- 乳酸脫氫酶 ( 兔肌 )2.5ku
活/死細(xì)胞染色試劑盒（Calcein AM·PI）1000 次
CAS7365-44-8N- 三 ( 羥甲基 ) 甲基 -2- 氨基乙烷磺酸5g
130877-1可逆性銅染試劑盒1套
α-Tubulin 小鼠單抗1000μL
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