Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；231-Cas9-551圖片

Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；231-Cas9-551圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達的人乳腺癌細胞；231-Cas9-551圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Puromycin，經(jīng)2ug/ml嘌呤霉素篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS；2ug/ml Puromycin
傳代方法  1:2~1:4傳代；每周2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：13,13；D12S391：17,18；D13S317：13,13；D16S539：12,12；D18S51：11,16；D19S433：11,14；D21S11：30,33.2；D2S1338：20,21；D3S1358：16,16；D5S818：12,12；D6S1043：18,18；D7S820：8,9；D8S1179：13,13；FGA：22,23；Penta E：11,11；TH01：7,9.3；TPOX：8,9；vWA：15,18；
同工酶 
染色體 
使用權限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

接頭 DNA(pSma I)5nmol
CAS9004-54-0葡聚糖50g
12-206Rosetta-gami B(DE3) 菌種1mL
一步法 96 孔板質粒 DNAout( 離心法 )1次
JM110 感受態(tài)細胞10×100μL
魚精蛋白硫酸鹽1g
乙烯乙二醇200mL
CAS51-35-4L- 羥基脯氨酸5g
60210-10硫酸鏈霉素溶液 ,50mg/mL10mL
印跡膜抗體稀釋液100mL
聚乙二醇 8000250g
次黃嘌呤1g
MMLV 逆轉錄酶 (H-)1000U
CAS69-57-8青霉素 G 鹽1g
131070-1牛血清白蛋白標準品，2mg/mL1mL
重組蛋白 G1mg
LBA4404 農桿菌菌種1mL
葡萄糖 -6- 磷酸脫氫酶1000U
雙染細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V- 熒光素 555·7-AAD）50 次
CAS29915-38-63- 三 ( 羥甲基 ) 甲基 -3- 氨基丙烷磺酸10g
80812-250考馬斯亮藍 G-250 染液250mLBOC-D-SER-OMEBOC-D-絲氨酸酯95715-85-8
4-Chlorophenyl isocyanate對異酸酯104-12-1
BUTADIENE MONOXIDE環(huán)氧丁烷930-22-3
Diethylene glycol dibenzoate二酸二甘醇酯120-55-8
1-Methylimidazole1-基咪唑616-47-7
CI 42755胺蘭(水溶)28631-66-5
AMMONIUM POLYSULFIDE多硫化銨12259-92-6
SILICON NITRIDE氮化硅12033-89-5
Solvent Red 109溶劑紅10953802-03-2
Liriopeside B山麥冬皂苷B182284-68-0
3-(N,N-Dimethylpalmitylammonio)propanesulfonate3-磺丙基十六烷基二甜菜2281-11-0
4-Iodophenetole對碘699-08-1
Lithium sulfate monohydrate一水硫酸鋰10102-25-7
DIETHYL BENZYLPHOSPHONATE二乙基芐基膦酸酯1080-32-6
Ginsenoside Rd人參皂甙 Rd52705-93-8
1-ALLYL-3-METHYLIMIDAZOLIUM CHLORIDE化1-丙基-3-基咪唑65039-10-3
NA甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂
AMBERLITEAMBERLITE IRA402 CL陰離子交換樹脂52439-77-7
NA裨士麥棕Y
Methyl DL-mandelateDL-扁桃酸酯4358-87-6
1,3-BIS(DICYCLOHEXYLPHOSPHINO)PROPANE1,3 -雙（二環(huán)己膦基）丙烷103099-52-1
TIN錫7440-31-5
2-Ethylhexyl bromide溴代異烷18908-66-2
3-BROMOPROPIONITRILE3-溴2417-90-5
α- 酮戊二酸5g