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Cas9穩(wěn)定表達的人子宮內(nèi)膜腺癌細胞；HEC-1-B-Cas9-588圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達的人子宮內(nèi)膜腺癌細胞；HEC-1-B-Cas9-588圖片
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞是采用慢病毒感染的方式使HEC-1B細胞穩(wěn)定表達Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗證該克隆可以表達Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS；400ug/ml G418
傳代方法 消化3-5分鐘；1:2傳代；3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 C3
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR Amelogenin：x,x；CSF1PO：10,12；D12S391：18,19；D13S317：11,11；D16S539：11,12；D18S51：16,20；D19S433：13,13；D21S11：30,31；D2S1338：18,19；D3S1358：15,15；D5S818：11,13；D6S1043：12,18；D7S820：9,11；D8S1179：13,14；FGA：21,21；Penta E：11,11；TH01：6,7；TPOX：8,11；vWA：18,18；
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
60803-50可保種型藍白 T 載體50ng
L-Canavanine(iNOS 抑制劑 )20mg
Sodium orthovanadate( 磷酸酯酶抑制劑 )2g
130675-250核糖核酸酶 HII250U
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH)30 次
酚 - 混合液 (DNA 提取 )100mL
DNA 探針變性液10mL
青鏈霉素溶液100mL
CAS37326-33-3透明質(zhì)酸酶100mg
80904-5大提柱式真菌 RNAout5次
DNA 促旋酶 (E.coli)100U
dITP 溶液，2.5mM2mL
140626-50細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-APC）50 次
19-0140-500McCoy's5A 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )500mL
70303-1.5綠如藍核酸染料 (UV)1.5mL
谷氨酰胺測試盒48 T
雙染細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-APC·7-AAD） 20 次
23-0650-1SB203580(p38MAPK 抑制劑 )1mg
胎盤堿性磷酸酶檢測試劑盒100 次
維生素 B110g
天狼猩紅5g
RNase A 溶液，10mg/mL1.5mL
120623-500β- 瓊脂糖酶Ⅰ500U
乙酰丁香酮1gEJ(人膀胱細胞)5×106cells/瓶×2
LB瓊脂/LB Agar大腸桿菌增殖250克國產(chǎn)/進口
葡萄糖銨培養(yǎng)基/Ammonium Dextrose Medium志賀氏菌的葡萄糖銨試驗250克國產(chǎn)/進口
PA319(人大腸細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠腎系膜細胞*培養(yǎng)基100mL
人腦微血管內(nèi)細胞*培養(yǎng)基100mL
大鼠腸微血管細胞*培養(yǎng)基100mL
RKO-AS45-1(人結(jié)腸轉(zhuǎn)基因細胞)5×106cells/瓶×2
MSC, 小鼠雪旺細胞gersion
GNM(人口腔鱗頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移細胞)5×106cells/瓶×2
Hela S3(人宮頸細胞)5×106cells/瓶×2
黃芪甲苷規(guī)格：100mg/支；98%
糖發(fā)酵管BR20支國產(chǎn)/進口
SF-295(人XG惡性膠質(zhì)瘤細胞)5×106cells/瓶×2
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝細胞)5×106cells/瓶×2
HPAC(人胰腺腺泡上)5×106cells/瓶×2
LBS瓊脂/酸菌選擇性瓊脂/LBS Agar用于酸桿菌的檢測250克國產(chǎn)/進口
葡萄球菌增菌肉湯/Staphylococcus Enrichment Broth凝固酶陽生葡萄球菌選擇性增菌250克國產(chǎn)/進口
PC-3M(人前列腺細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠腎小管上細胞*培養(yǎng)基100mL
人內(nèi)臟脂肪細胞*培養(yǎng)基100mL
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