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詳細(xì)介紹
人肝癌細(xì)胞；BEL-7405圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人肝癌細(xì)胞；BEL-7405圖片
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 胎牛血清，10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
DNA 堿性膠上樣液 ,6×1.5mL
氣相 RNase 清除劑120mL
140657-25非變性蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)25mg
RNase-free EDTA 溶液 ,0.5M,pH 8.0100mL
動(dòng)物細(xì)胞核蛋白微量制備試劑盒100 次
CAS3458-28-4D- 甘露糖5g
CAS7447-41-8氯化鋰 ( 無(wú)水 )100g
100601-50細(xì)胞核微量制備試劑盒50 次
土壤腐殖酸清除劑100mL
金黃色葡萄菌 V8 蛋白酶1mg
AFLP 試劑盒 (EcoRI-MseI)1600 次
80919-596 孔板 PCR 片段純化回收試劑盒 ( 離心法 )5次
HRP 標(biāo)記內(nèi)參抗體 (β-Tubulin)20μL
DNA 修復(fù)混合液 30 次
AH109 酵母菌種1mL人腺上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基/Motility-Nitrate Medium產(chǎn)氣莢膜梭菌的動(dòng)力試驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
大鼠腎小管平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
亞硫酸鉍瓊脂/BS瓊脂/Bismuth Sulfite Agar用于食品中沙門氏菌的檢驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
PANC-1(人胰腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
GH3(大鼠垂體瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠肝外膽管上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
人前脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
TT(人甲狀腺導(dǎo)管細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HuTu-80(人十二脂腸腺)5×106cells/瓶×2
中分子量單一蛋白Marker（45 kD）50次國(guó)產(chǎn)
人腺導(dǎo)管細(xì)胞英文名稱：MDA-MB-435S
大鼠下脂肪細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
NCI-H446(人小細(xì)胞肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2gersion
Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)規(guī)格：100次
PYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)/PYG Broth Base雙岐桿菌增菌培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
沙門氏志賀氏屬瓊脂培養(yǎng)基/SS瓊脂/Salmonella Shigella Agar沙門氏菌屬和志賀氏菌屬的分離培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
U251(人膠質(zhì)瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小鼠畸胎瘤細(xì)胞英文名稱：Pcc4
人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞英文名稱：MT-4
U-2 OS, 人骨肉瘤細(xì)胞
LLC(小鼠肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
克必隆 eTS PCR 法 cDNA 合成試劑盒10 次
12-145JM83 菌種1mL
綠如蘭核酸染料 ( 可見(jiàn)光型 )10mL
氯霉素溶液 ,25mg/mL10mL
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