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詳細(xì)介紹
人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞；MEG-01圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞；MEG-01圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 MEG-01細(xì)胞株源自一位CML患者成巨核細(xì)胞轉(zhuǎn)換期的骨髓細(xì)胞。 細(xì)胞質(zhì)因子VIII和表面球蛋白IIb/IIIa，高碘酸-Schiff(PAS)反應(yīng)，α醋酸萘酯酶和酸性磷酸酶陽性。 髓過氧化物酶，α丁酸萘酯酶，氯化醋酸AS-D萘苯酚酯酶和堿性磷酸酶陰性。 用單克隆抗體BA-1(抗B細(xì)胞，粒性白細(xì)胞)，HPL-3(抗球蛋白IIb/IIIa)和20.3(抗單核細(xì)胞，血小板)染色成陽性。 其他淋巴和骨髓類抗體成陰性。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%
傳代方法 1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
一管式病毒 RNAout50 次
120507-25Xa 因子蛋白酶25μg
遺傳100mg
4mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個(gè)
X33 酵母菌種1mL
CAS58-58-2嘌呤鹽酸鹽25mg
CAS3483-12-3二硫蘇糖醇 (DTT)5g
81028-25一站式植物 mRNAout25 次
DNA CTAB 溶液，20%100mL
Southern 細(xì)菌 (G-)DNAout10 次
81203-20SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )20L
RNA DEPC ( 焦碳酸二乙酯 )10mL
動物上皮細(xì)胞生長因子5mL
D/F12 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )100mL
魯米諾血跡鑒定試劑盒100mL
120895-200大鼠白細(xì)胞分離液 1.084200mL
天凈沙細(xì)胞蛋白質(zhì) -RNA 雙提取試劑盒 50 次
交聯(lián)瓊脂糖凝膠 6B100mL
嘌呤干粉25mg
23-0240-100Etoposide( *泊苷 / 鬼臼乙叉苷 )100μL
81224-100BCIP/NBT 顯色試劑盒100mL
油紅 O5gBenzene in Toluene氣相色譜儀檢定用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（-溶液）
Pepstatin胃蛋白酶抑制劑26305-03-3
5-Acetylamido-2-chloroaniline3-氨基-4-乙酰胺51867-83-5
101 White support101白色擔(dān)體
Sodium gluconateD-葡萄糖酸527-07-1
N-BOC-ETHYLENEDIAMINE HYDROCHLORIDEN-BOC-乙酸79513-35-2
Homophthalic acid鄰羧基乙酸89-51-0
6-Aminopyridine-3-carboxamide6-氨基煙酰胺329-89-5
Basic protease性蛋白酶
2'-Chloroacetophenone鄰乙2142-68-9
N-NITROSO-DI-ISO-PROPYLAMINEN-亞基二異丙胺601-77-4
3-Indolepropionic acid吲哚-3-丙酸830-96-6
6-Nitroindole6-基吲哚4769-96-4
2-BROMO-5-IODOBENZOIC ACID2-溴-5-碘酸25252-00-0
2,2'-THENOIN2-羥基-1,2-二(2-噻吩基)乙烷-1-27761-02-0
Methyl L-tyrosina-酪氨酸酯1080-06-4
1,1-Bis(hydroxymethyl)cyclopropane1,1-環(huán)丙烷二醇39590-81-3
4-Chloroindole4-吲哚25235-85-2
N-(3-chloropropyl)dibutylamineN-(3-丙基)二正丁胺36421-15-5
96 孔板病毒 DNAout( 真空法 )1次
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