人喉癌上皮細(xì)胞；Hep-2圖片

人喉癌上皮細(xì)胞；Hep-2圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人喉癌上皮細(xì)胞；Hep-2圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  zui初認(rèn)為這個細(xì)胞源自喉上皮癌，但隨后通過同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn)，該細(xì)胞已被HeLa污染；角蛋白陽性。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C360
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

維生素 D31g
動態(tài)濁度法內(nèi)毒素定量試劑盒1.7mL×10 支
CAS25322-68-3聚乙二醇 3350250g
130420-1Protein G 瓊脂糖1mL
終點(diǎn)顯色法內(nèi)毒素定量試劑盒32 次
LB 平板培養(yǎng)基 (Amp 抗性 )10 塊
膠原酶Ⅳ型100mg
細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-PE）20 次
CAS18883-66-4鏈脲佐菌素100mg
70102C-10蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (43.0-200.0KD)10 次
α- 環(huán)狀糊精250mg
氯化鋰 ( 無水 )100g
組蛋白25g
琥珀酸脫氫酶測試盒48 T
CAS9002-10-2多酚氧化酶 ( 菌菇 )25KU
101103D-1玻璃勻漿器 ,10mL1套
101119-5柱式真菌 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次
NS-398(COX-2 抑制劑 )1mg
6- 羥基多巴胺5g
BCECF AM1mg
長效期 SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )(>30KD)20L
22-0110-100Calcein M 100mg
17-016-96200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 盒裝 )96 支
嘌呤霉素干粉25mg
白細(xì)胞裂解液100mL
Simvastatin(HMG-CoA Reductase 抑制劑 )10mg
T3 RNA 聚合酶1000U70502-30石蠟包埋組織 DNAout30 次
柱式醬油 DNAout10 次
凝血酶1000U
TG1 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10
CAS147-94-4β-D- 阿糖胞苷50mg
壯觀霉素溶液 ,50mg/mL10mL
Cyclosporin A( 免疫抑制劑 /PP2B 抑制劑 )50mg
高 GC 革氏陽性細(xì)菌 PCR Mix 5100 次
脂蛋白 PAGE 染液1套
CAS77-86-1三 ( 羥甲基 ) 氨基甲烷100g
80101-50一管式病毒 DNA-RNAout50 次
二甲基酸5g
DNA Shuffling 試劑盒10 次
21-0320-5 少突膠質(zhì)前體細(xì)胞生長因子5mL
雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V- 熒光素 555·7-AAD）50 次
醛基磁珠2mL
抗氟離子酸性磷酸酶檢測試劑盒120 次 
Golgi-Tracker Red( 高爾基體紅色熒光探針 )1mg
130612-500Bst DNA 聚合酶，全長500U
Y1090 菌種1mL
磷酸二酯酶Ⅰ100U
0.5mLDNA 離心超濾管 (300-500 KD)1個
CAS53597-25-4魚精蛋白硫酸鹽1g
CAS69-78-35,5- 二硫代雙 (2- 硝基苯甲酸 )1g
β －瓊脂糖酶25U