人肝癌細胞；BEl-7402圖片

人肝癌細胞；BEl-7402圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱 人肝癌細胞；BEl-7402圖片
形態(tài)特性  上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  BEL-7402細胞株是1974年從臨床肝癌手術(shù)標本中建立的。 細胞群體倍增時間為20小時。 移植到處理過的wistar大鼠中的能形成腫瘤結(jié)節(jié)。 細胞形態(tài)呈上皮樣細胞。 在電子顯微鏡下亦顯示上皮細胞所具有的橋粒和張力原纖維，與臨床肝癌細胞相似。 分瓶培養(yǎng)第四天時，其有絲分裂指數(shù)約為7%。 BEL-7402細胞的染色體數(shù)為不足三倍體，有一個異常的近端著絲點染色體。 間接免疫熒光法測BEL-7402細胞內(nèi)的AFP為陽性反應(yīng)。 LDH同工酶譜顯示與成年人肝細胞不同，而與人胚肝及臨床肝癌相近。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C261
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

嘌呤硫酸鹽5g
miRNA 熒光定量檢測試劑盒25 次
CAS75-12-7去離子甲酰胺100mL
130681-0.83通用 miRNA 克隆接頭0.83nmol
一站式 TA 克隆試劑盒 ( 含感受態(tài) )20 次
甲基綠1g
異硫氰酸胍25g
色素細胞生長因子5mL
DNA  SDS( 十二烷基硫酸 )100g
140626-20細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-APC）20 次
90101-50大片段 DNA 分子量標準50μg
嗜熱菌蛋白酶25mg
動物細胞裂解液 B50mL
四硼酸，十水100g
人基因組 DNA，男性100μg
CAS110-16-7馬來酸100g
100833-5PMSF 溶液，10mg/mL5mL
柱式軟骨 RNAout50 次
麥芽浸粉250g
ATP 依賴的 DNase200UDAF-FM DA(NO 熒光探針 )100 次
90501-250Tth DNA 聚合酶250U
胸嘧啶5g
植物血球凝集素 P5mg
4’,6- 二脒基 -2- 苯基吲哚二鹽酸鹽10mg
大提柱式血液 RNAout5次
CAS9004-54-0葡聚糖 T-50010g
α- 氰基 -4- 羥基肉桂酸10g
超敏化學發(fā)光 (HRP) 檢測試劑盒（ECL）25mL
G(5′)ppp(5′)G 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD
120101-2谷胱甘肽瓊脂糖2mL
140625-20雙染細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-APC·7-AAD） 20 次
19-0060-100 F12 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )100mL
兔抗 His 標簽多抗，HRP 標記100μL
二甲基亞砜100mL
長效期 SDS-PAGE 還原劑10mL
120668E-10.5mLDNA 離心超濾管 (300-500 KD)1個
海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒100 次
加拿大樹膠100mL
非凍型血液 RNA 保存液100mL
口腔拭子 ( 醫(yī)用簡裝 ) 20只/袋