詳細(xì)介紹
人慢性髓系白血病細(xì)胞;K562圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人慢性髓系白血病細(xì)胞;K562圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣;圓形
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系由Lozzio and Lozzio 于1975年從一名53歲慢性髓系白血病女性患者的胸水中分離建立。此細(xì)胞株被廣泛用于自然殺傷方面的研究。K-562母細(xì)胞是一種具多能性的造血系統(tǒng)的惡性腫瘤細(xì)胞,能自發(fā)分化成可識(shí)別的紅系、粒系和單核系的祖細(xì)胞;表達(dá)CD7。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:3傳代;3-5天一次
傳代情況 PN12
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR Amelogenin:X;D8S1179:12;D21S11:29, 31;D7S820:9,11;CSF1PO:9,10;D3S1358:16;TH01:9.3;D13S317:8;D16S539:11,12;D2S1338:17;D19S433:14,14.2;vWA:16;THOX:8, 9;D18S51:15,16;D5S818:11,12;FGA:21, 24。
同工酶
染色體 59-68
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
雜交袋20 個(gè)
鏈霉親和素,AP 標(biāo)記0.5mL
1000 μL RNase-free 藍(lán)吸頭 ( 盒裝 )100 支
5-Fluorouracil(5- 氟脲嘧啶 )1mL
UTP 溶液,100mM0.25mL
18-0690-100脂質(zhì)氧化 (MDA) 檢測(cè)試劑盒100 次
130905-10超雜交液 ( 芯片 )10mL
TE 緩沖液,PH8.010mL
非凍型血液 DNA 保存液100mL
多聚 -L- 賴氨酸 (15-30 萬(wàn) )25mg
魚(yú)類種屬鑒定 PCR Mix100 次
CAS25988-63-0多聚 -L- 賴氨酸 (7-15 萬(wàn) )25mg
130528-1植物蛋白酶抑制劑1mL
柱式動(dòng)物線粒體 DNAout,測(cè)序15 次
冷凍型血液 RNA 保存液100mL
聚乙烯醇100g
微量 RNA 定量試劑盒1mL
CAS77-86-1三 ( 羥甲基 ) 氨基甲烷100g兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人總膽固醇(TC)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人載脂蛋白A4(apo-A4)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人胰蛋白酶原Ⅱ(Try-Ⅱ)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子B(VEGF-B)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人纖溶酶原(Plg)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人脫氫表雄酮(DHEA)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人輸血傳播毒/辛型肝炎毒((TTV)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人乳腺易感蛋白1(BRCA-1)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人破傷風(fēng)抗體(Tetanus Ab)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人免疫球蛋白輕鏈kappa抗體(κ-IgLC)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人鏈激酶(SK)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體(RANA)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人抗IVIgG抗體ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人甲種胎兒球蛋白/人甲胎蛋白(AFP)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人黑色素細(xì)胞抗體(MC Ab)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(HGFR/ c-MET)ELISA試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人波形蛋白(VIM)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
人白介素5(IL-5)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝