詳細(xì)介紹
小鼠白血病細(xì)胞;P388圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 小鼠白血病細(xì)胞;P388圖片
形態(tài)特性
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 馬血清,10%
傳代方法 1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
VER-49009 (500 ug)3-(5-chloro-2,4-dihydroxyphenyl)-N-ethyl-4-(4-methoxyphenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamide; VER-49009
FKGK 11 (1 mg)1,1,1,2,2-pentafluoro-7-phenyl-3-heptanone; FKGK 11
Fumonisin B2 (5 mg)1,1’-[(1S,2R)-1-[(2S,9R,11S,12S)-12-amino-9,11-dihydroxy-2-methyltridecyl]-2-[(1R)-1-methylpentyl]-1,2-ethanediyl]ester-1,2,3-propanetricarboxylic acid; Fumonisin B2
CAY10599 (1 mg)2-[[1-[3-[4-([1,1’-biphenyl]-4-ylcarbonyl)-2-propylphenoxy]propyl]-1,2,3,4-tetrahydro-5-quinolinyl]oxy]-2-methyl-propanoic acid; CAY10599
KN-93 (5 mg)N-[2-[[[3-(4-chlorophenyl)-2-propen-1-yl]methylamino]methyl]phenyl]-N-(2-hydroxyethyl)-4-methoxy-benzenesulfonamide; KN-93
Milrinone (10 mg)1,6-dihydro-2-methyl-6-oxo-[3,4’-bipyridine]-5-carbonitrile; Primacor |WIN 47,203; Milrinone
Apelin-13 (10 mg)L-glutaminyl-L-arginyl-L-prolyl-L-arginyl-L-leucyl-L-seryl-L-histidyl-L-lysylglycyl-L-prolyl-L-methionyl-L-prolyl-L-phenylalanine; Apelin-13
(R)-Lisofylline (10 mg)3,7-dihydro-1-[(5R)-5-hydroxyhexyl]-3,7-dimethyl-1H-purine-2,6-dione; (-)-Lisofylline|(R)-LSF; (R)-Lisofylline
IWR-1-endo (25 mg)4-[(3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-hexahydro-1,3-dioxo-4,7-methano-2H-isoindol-2-yl]-N-8-quinolinyl-benzamide; IWR-1-endo
OU749 (10 mg)N-[5-[(4-methoxyphenyl)methyl]-1,3,4-thiadiazol-2-yl]-benzenesulfonamide; OU749
Lagochiline (25 mg)(4’aS)-decahydro-6’S-hydroxy-5-(2-hydroxyethyl)-2’R,5’,8’aS-trimethyl-spiro[furan-2(3H),1’R(2’H)-naphthalene]-5S,5’R-dimethanol; Lagochiline
Prostaglandin E2 p-acetamidophenyl ester (10 mg)9-oxo-11。alpha。,15S-dihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid, (4-acetylamino)phenyl ester; PGE2 p-acetamidophenyl ester; Prostaglandin E2 p-acetamidophenyl ester
19(R)-hydroxy Prostaglandin E2 (500 ug)9-oxo-11α,15S,19R-trihydroxy-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid; 19(R)-hydroxy PGE2|19(R)-OH PGE2; 19(R)-hydroxy Prostaglandin E2克必隆 B 載體2μg
BJ5183 菌種1mL
130857-2000T4 RNA 連接酶 2( 截短型 K227Q)2000U
100942-30單孢子全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次
微量蛋白沉淀試劑盒50 次
Helly 固定液250 mL
D- 生物素 ( 維生素 H)1g
細(xì)胞周期與凋亡檢測(cè)試劑盒(PI 法)50 次
CAS1404-93-9鹽酸萬(wàn)古100mg
19-0190-100PRMI1640 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )100mL
130933-50FTA 血片 DNAout50 次
醛基磁珠2mL
DB3.1 菌種1mL
一步法 96 孔板質(zhì)粒 DNAout( 離心法 )1次
Lambda 核酸外切酶1000U
CAS10191-18-1 N,N- 雙 (2- 羥乙基 )-3- 氨基乙磺酸5g
12-264AH109 酵母菌種1mL
一管式拭子 DNAout100 次
可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制劑0.3mL
糊精250g
F12 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )100mL
水樣病毒沉淀劑10 次
130821-500阿爾瑪藍(lán)細(xì)胞增殖與細(xì)胞毒檢測(cè)試劑500 次
70503S-50DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (200-5000 bp)50 次
生物素化蛋白 A1mg