詳細(xì)介紹
小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC圖片
形態(tài)特性 上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 源自615小鼠。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購(gòu)買到貨后,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
β-Lapachone (10 mg)3,4-dihydro-2,2-dimethyl-2H-naphtho[1,2-b]pyran-5,6-dione; NSC 26326|SL 11001|ARQ 501|NSC 629749; β-Lapachone
ADB-PINACA pentanoic acid metabolite (5 mg)5-(3-((1-amino-3,3-dimethyl-1-oxobutan-2-yl)carbamoyl)-1H-indazol-1-yl)pentanoic acid; ADB-PINACA pentanoic acid metabolite
1,2-Dimyristoyl-sn-glycerol-3-PC (500 mg)1,2-dimyristoyl-sn-glycerol-3-phosphatidylcholine; 1,2-DMPC|1,2-Dimyristoyl-sn-glycerol-3-Phosphocholine; 1,2-Dimyristoyl-sn-glycerol-3-PC
2,5-DMMA (5 mg)2,5-dimethoxy-N,α-dimethyl-benzeneethanamine; 2,5-Dimethoxymethamphetamine; 2,5-DMMA
ML-233 (25 mg)(E)-4-methyl-5-(((phenylsulfonyl)oxy)imino)-[1,1’-bi(cyclohexane)]-3,6-dien-2-one; CID-46905036; ML-233
HPI-1 (10 mg)1,4,5,6,7,8-hexahydro-4-(3-hydroxyphenyl)-7-(2-methoxyphenyl)-2-methyl-5-oxo-3-quinolinecarboxylic acid-2-methoxyethyl ester; HPI-1
Oxytocin AChE Tracer (500 dtn)Oxytocin AChE Tracer
2,4-Diamino-6-hydroxypyrimidine (1 g)2,4-diamino-6(1H)-pyrimidinone; DAHP; 2,4-Diamino-6-hydroxypyrimidine
Prostaglandin E1 ethyl ester (1 mg)11α,15S-dihydroxy-9-oxo-prost-13E-en-1-oic acid, ethyl ester; Alprostadil ethyl ester|PGE1 ethyl ester; Prostaglandin E1 ethyl ester
Valganciclovir (hydrochloride) (10 mg)2-[(2-ami,6-dihydro-6-oxo-9H-purin-9-yl)methoxy]-3-hydroxypropyl ester L-valine, monohydrochloride; Ro 107-9070/194|Valcyte ; Valganciclovir (hydrochloride)
4-hydroxy Hexenal (5 mg)(±)-4-hydroxy-2E-hexenal; 4-HHE; 4-hydroxy Hexenal
SecinH3 (5 mg)N-
I-BET151 (10 mg)GSK 1210151A; 7,3,5-dimethyl-4-isoxazolyl-1,3-dihydro-8-methoxy-1-[1R-1-(2-pyridinyl)ethyl]-2H-imidazo[4,5-c]quinolin-2-one
(±)3-epi CP 47,497-C8-homolog (solution) (25 mg)rel-2-[(1S,3S)-3-hydroxycyclohexyl)]-5-(2-methylnonan-2-yl)phenol; (±)3-epi CP 47,497-C8-homolog (solution)上皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL
電泳尿素100g
21-0330-5少突膠質(zhì)前體細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL
101223-100RNA EDTA·2Na ( 乙二胺四二 )100g
PLPD 固定液250 mL
BglII500U
L-NAME(eNOS 抑制劑 )200mg
端粒酶重復(fù)片段擴(kuò)增試劑盒 (TRAP)50 次
23-0450-0.5LPS(TLR4 激活劑 )0.5mg
60705-50一管式植物 DNAout50 次
RNA Oligo(dT) 纖維素25mg
Cy5-dCTP 溶液,10mM25μL
加 A 試劑盒50 次
15mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)1個(gè)
130864-10Hoechst33258 干粉10mg
130520-2殼聚糖磁珠2mL
S-Methyl-ITU.sulfate(iN0S 抑制劑 )50mg
Di-2-ANEPEQ 5mg
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.0100mL
X33 酵母菌種1mL
130826-5cDNA 文庫(kù)構(gòu)建試劑盒5次
3621-0.1微量 DNA 助沉劑0.1mL
雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒(Annexin V- 熒光素 647·7-AAD)20 次
DTT,蛋白5g