詳細介紹
發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞;G1圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱發(fā)綠色熒光的小鼠胚胎干細胞;G1圖片
形態(tài)特性 上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應(yīng)將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。
血管成素樣蛋白3(ANGPTL3)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Angiopoietin Like Protein 3 (ANGPTL3)
膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Choline Acetyltransferase (ChAT)
整合素β5(ITGβ5)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Integrin Beta 5 (ITGb5)
封閉蛋白1(CLDN1)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Claudin 1 (CLDN1)
Paralemmin蛋白(PALM)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Paralemmin (PALM)
甲酰肽受體1(FPR1)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Formyl Peptide Receptor 1 (FPR1)
N-乙酰α-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGLU)單克隆抗體Monoclonal Antibody to N-Acetyl Alpha-D-Glucosaminidase (NAGLU)
細胞色素P450氧化還原酶(CPR)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Cytochrome P450 Reductase (CPR)
5-羥色胺受體2C(HTR2C)單克隆抗體Monoclonal Antibody to 5-Hydroxytryptamine Receptor 2C (HTR2C)
蛋白二硫化物異構(gòu)酶A4(PDIA4)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Protein Disulfide Isomerase A4 (PDIA4)
腎上腺素能受體α2C(ADRα2C)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Adrenergic Receptor Alpha 2C (ADRa2C)
白介素6(IL6)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Interleukin 6 (IL6)
瘤壞死因子受體超家族成員7(TNFRSF7)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 7 (TNFRSF7)
趨化素樣因子超家族成員6(CKLFSF6)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Chemokine Like Factor Superfamily 6 (CKLFSF6)
膜聯(lián)蛋白A10(ANXA10)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Annexin A10 (ANXA10)
含CUB域蛋白1(CDCP1)單克隆抗體Monoclonal Antibody to CUB Domain Containing Protein 1 (CDCP1)
氨酰tRNA合成酶(RARS)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Arginyl tRNA Synthetase (RARS)10 次 柱式血液 mtDNAout,測序
1g 硫酸卡那
100g DEAE 纖維素
100 支 1000 μL RNase-free 藍吸頭 ( 盒裝已滅菌 )
D- 氨基酸氧化酶 CAS9000-88-8 5 mg
VDAC1 小鼠單抗 140593-100 100 μL
非凍型拭子毒保存液 91103-100 100mL
20 次 免疫蛋白清除劑
5g 3-(3,4- 二羥基苯 )-L- 丙氨酸
5mL 間充質(zhì)干細胞生長因子 - 無血淸
1mL 胃蛋白酶抑制劑溶液,1 mg/mL
角質(zhì)細胞生長因子 21-0170-5 5mL
RNase-free 鹽酸胍溶液 ,8M 100905-100 100mL
5次 PCR 法 DNA 探針標記試劑盒
5mg 氨基喋呤
25mg Genistein( 酪氨酸蛋白激酶抑制劑 )
2mL 磁珠
常規(guī) DNA 測序服務(wù) D006-1 1次
Rosetta-gami(DE3) 感受態(tài)細胞 130559-10 0.1mL×10
1000μL 小鼠抗 SUMO 標簽蛋白單抗
500mL 甲醇
100g 三氯
96 支 10 μL RNase-free 白吸頭 ( 盒裝已滅菌帶芯長尖 )
200mL 自誘導培養(yǎng)基 (lac 啟動子 )