雜交瘤細胞；A375sci*

雜交瘤細胞；A375sci*質量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。 細胞到達客戶手中，1個月內出現任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。

雜交瘤細胞；A375sci*操作步驟：

1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內，吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉移到無菌離心管內，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細胞名稱
形態(tài)特性  淋巴母細胞樣
生長特性 半貼壁生長
特征特性  該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權限 未定
細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。

pBS KS(+)
pCB4
pcDNA6.2/C-YFP-DEST(pcDNA6.2CYFPDEST)
pCMV-dR8.2 dvpr（pCMVdR8.2dvpr）
pCMV6-AN-His-HA(pCMV6ANHisHA)
pCW-Cas9（pCWCas9）（60908-2378）
pDONR223
pEF1/V5 His C（pEF1V5HisC）
pET-24b(+)(pET24b)(60908-2788)
pET-GST（pETGST）（60908-2768）
pFA6a-3HA-TRP1(pFA6a3HATRP1)
pFlag-CMV-1(pFlagCMV1)
pGEM-3z/626(pGEM3z626)
pGL4.31[luc2P GAL4UAS Hygro]
pHcRed1
pHT304（60908-4160）
pIRES2-EGFP(pIRES2EGFP)（60908-4260）y
pJW2
pLenti CMV/TO DEST （pLentiCMVTODEST）(775-1)
pLIC-CH
pLVX-Hom-Nuc1(pLVXHomNuc1)FLASH/CASP8AP2  半胱氨酸蛋白酶8相關蛋白2抗體規(guī)格: 0.1ml
Properdin  P因子/備解素抗體規(guī)格: 0.1ml
Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標記的羊抗豚鼠IgG規(guī)格: 0.1ml
Phospho-FAK/PTK2(Tyr397)  磷酸化粘著斑激酶抗體規(guī)格: 0.1ml
FAM59B  FAM59B蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Bovine IgG/PE  PE標記的羊抗牛IgG規(guī)格: 0.1ml
phospho-MEK1/MAP2K1(Thr292)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體規(guī)格: 0.1ml
CCDC46  卷曲螺旋結構域蛋白46抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgM  兔抗馬IgM規(guī)格: 1mg
phospho-EGFR (Thr678)  磷酸化表皮生因子受體抗體規(guī)格: 0.1ml
beta-Amyloid(25-35)  β淀粉樣肽（25-35）抗體規(guī)格: 0.1ml
XRCC1  X射線修復交叉互補蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
DPPA2/PESCRG1  多能發(fā)育相關基因2抗體規(guī)格: 0.1ml
ABHD13  水解酶結構域蛋白13抗體規(guī)格: 0.2ml
ULBP2/N2DL2  UL16結合蛋白2抗體規(guī)格: 0.2ml
DCIR/CLEC4A  C型凝集素結構域家族4成員A抗體規(guī)格: 0.2ml
katanin p80  劍蛋白p80抗體規(guī)格: 0.2ml
Transferrin  轉鐵蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
Cyclin B1  周期素B1抗體規(guī)格: 0.1ml
RACGAP1  Rho GTP酶激活蛋白GAP抗體規(guī)格: 0.2ml
TGF beta R2/TGFBR2  轉移生因子β受體2抗體（TGF-βRⅡ）規(guī)格: 0.2ml