雜交瘤細胞株；5D1圖片

雜交瘤細胞株；5D1圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 雜交瘤細胞株；5D1圖片
形態(tài)特性  淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Mouse IgA  兔抗小鼠IgA抗體規(guī)格: 0.2ml
C11ORF46  11號染色體開放閱讀框46抗體規(guī)格: 0.2ml
ChRM3/Acetylcholine receptor(M3)  毒蕈堿型乙酰膽堿受體M3抗體規(guī)格: 0.1ml
Phospho-MDM2 (Ser166)  磷酸化雙微體2基因抗體規(guī)格: 0.1ml
HIV1 p55 + p17  艾滋病病毒p55抗體規(guī)格: 0.2ml
ADH/AVP  抗利尿激素/血管升壓素抗體（和肽素） 0.1ml
Methionine adenosyltransferase  蛋氨酸腺苷轉(zhuǎn)移酶抗體規(guī)格: 0.2ml
ANKRD26  錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體規(guī)格: 0.2ml
AGPAT4  溶血磷脂酸酰基轉(zhuǎn)移酶D抗體 0.2ml
phospho-LKB1 (Thr363)  磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體規(guī)格: 0.1ml
DUX3  DUX3蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
FUCA1/Alpha L fucosidase I  α-L巖藻糖苷酶抗體 0.2ml
KLK11  激肽釋放酶11抗體規(guī)格: 0.1ml
Frataxin  線粒體型共濟失調(diào)蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
hemagglutinin protein/H  麻疹病毒血凝素抗體 0.2ml
ST2  白細胞介素1受體相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
SMARCD3  肌動蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子SMARCD3蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-human IgG/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的驢抗人IgG規(guī)格: 0.1ml
IFN gamma  干擾素-γ抗體規(guī)格: 0.1ml
SIP1  Smad蛋白相互作用蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-MK IgM/Cy7  Cy7標(biāo)記的兔抗猴IgM規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Histone H3 (Ser28)  磷酸化組蛋白H3抗體規(guī)格: 0.1ml
YES1  原基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體規(guī)格: 0.1ml重組蛋白 A/G    1mg    131081-1
50 次        柱式 DNA 清除劑
10mg        Lovastatin(HMG-CoA Reductase 抑制劑 )
10g        胃蛋白酶 1:10000
50 次        Caspase 3 檢測試劑盒
噻苯隆    25mg    CAS51707-55-2
銀染清除劑    30 次    100603-30
100g        β- 淀粉酶
1mL        M15 菌種
5g        2,4- 二氯苯氧
100 次        神經(jīng)氨酸酶檢測試劑盒
50 次        通用型 LAMP 試劑盒
Baker 甲醛鈣中性固定液    250 mL    131276-250
柱式病毒 RNA-DNA 雙提試劑盒    50 次    130971-50
5g        鳥嘌呤
1次        96 孔板病毒 DNAout( 離心法 )
10mg        DiI( 細胞膜紅色熒光探針 )
1張        硝酸纖維素膜，13×20cm
DiO( 細胞膜綠色熒光探針 )    10mg    22-0270-10
非凍型組織 DNA 保存液    250mL    3660-250
25g        葡聚糖凝膠 G-50 中顆粒
5g        苯酚紅
1mg        U0126(MEK1/2 抑制劑 )
750U        核酸外切酶 I