雜交瘤細(xì)胞株；WV-Vi-01說(shuō)明書(shū)

雜交瘤細(xì)胞株；WV-Vi-01說(shuō)明書(shū)采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時(shí)，若干冰已經(jīng)*融化，請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)；若尚留有干冰，請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用，請(qǐng)按條件貯存細(xì)胞，切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

雜交瘤細(xì)胞株；WV-Vi-01說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞株；WV-Vi-01說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開(kāi)。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

G protein beta subunit like  G蛋白β樣蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-human IgG  兔抗人IgG規(guī)格: 1mg
Phospho-ELk1 (Ser389)  磷酸化細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ELK1抗體規(guī)格: 0.1ml
AGFG1  艾滋病病毒復(fù)制結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Klotho  Klotho多肽蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
E2F2  轉(zhuǎn)錄因子E2F-2抗體規(guī)格: 0.1ml
BEX4  腦表達(dá)X連鎖蛋白4抗體規(guī)格: 0.2ml
VEGF-A/VEGF 165  血管內(nèi)皮生因子A抗體規(guī)格: 0.1ml
DDX4/MVH  DDX4抗體規(guī)格: 0.1ml
TRIM29/ATDC  共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥D相關(guān)蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
TSHB(2T11)  促甲狀腺素單克隆抗體規(guī)格: 0.1ml
CYLD  微管結(jié)合蛋白CYLD抗體規(guī)格: 0.1ml
DUSP13  雙特異性磷酸酶13抗體規(guī)格: 0.2ml
Tat  細(xì)胞酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶抗體規(guī)格: 0.2ml
CNTF  睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗體規(guī)格: 0.1ml
B3GALNT1  β1，3半糖轉(zhuǎn)移酶3抗體規(guī)格: 0.2ml
SRG11/Spata17  睪凋亡基因抗體規(guī)格: 0.1ml
C-jun/AP-1  原基因蛋白/活化蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml
SERPINA12/Vaspin  內(nèi)臟脂肪組織源性絲氨酸蛋白酶抑制蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
SLC16A3/MCT4  單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3/4抗體規(guī)格: 0.2ml
LGALS3BP  可溶性半糖凝集素3結(jié)合蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
Nucleolar protein 3/Apoptosis repressor with CARD  核仁蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml
SATB1  核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合蛋白1抗體規(guī)格: 0.1ml
CD54/ICAM-1  細(xì)胞間粘附分子-1抗體規(guī)格: 0.1ml25mg        多聚 -L- 賴氨酸 (15-30 萬(wàn) )
100g        RNA  GuSCN( 異硫氰酸胍 )
50U        尿嘧啶切刻酶
Northern 雜交技術(shù)服務(wù)    1 張膜    R003-1
ATP 溶液，100mM    0.25mL    120625-0.25
100mg        胃粘膜素
5g        Glucosamine( 胰島素抵抗誘導(dǎo)劑 )
500g        鐵氰化
25 次        miRNA cDNA *鏈合成試劑盒
酪蛋白    50g    CAS9000-71-9
DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞    10×100μL    140218-10
200mL        小鼠淋巴細(xì)胞分離液 1.092
10mg        Hydroxystilbamidine 
5g        嘌呤硫
25 次        miRNA 熒光定量檢測(cè)試劑盒
去離子甲酰胺    100mL    CAS75-12-7
通用 miRNA 克隆接頭    0.83nmol    130681-0.83
20 次        一站式 TA 克隆試劑盒 ( 含感受態(tài) )
1g        甲基綠
25g        異硫氰酸胍
5mL        色素細(xì)胞生長(zhǎng)因子
100g        DNA  SDS( 十二烷基硫酸 )
細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（Annexin V-APC）    20 次    140626-20
大片段 DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)    50μg    90101-50