雜交瘤細胞株；K3L35說明書

雜交瘤細胞株；K3L35說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱雜交瘤細胞株；K3L35說明書
形態(tài)特性  淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

小鼠抗小核核試劑盒規(guī)格型號：96T/48T小鼠抗小核核試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗小核核試劑盒、小鼠抗小核核elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。
兔子可溶性CD40配體試劑盒規(guī)格型號：96T/48T兔子可溶性CD40配體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子可溶性CD40配體試劑盒、兔子可溶性CD40配體elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。
兔子端粒酶試劑盒規(guī)格型號：96T/48T兔子端粒酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子端粒酶試劑盒、兔子端粒酶elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。
兔抗平滑肌抗體試劑盒規(guī)格型號：96T/48T兔抗平滑肌抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔抗平滑肌抗體試劑盒、兔抗平滑肌抗體elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。
人組試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人組試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人組試劑盒、人組elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。
人瘤壞死可溶性受體Ⅰ試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人瘤壞死可溶性受體Ⅰ試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人瘤壞死可溶性受體Ⅰ試劑盒、人瘤壞死可溶性受體Ⅰelisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。50 次        細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-PE）
琥珀酸 ( 丁二酸 )    25g    CAS110-15-6
預(yù)染蛋白質(zhì)電泳分子量標準 (14.4-97.4KD)    10 次    70704A-10
1g        α- 糜蛋白酶
100g        氯化鎂六水
250mg        核酸組蛋白 ( 小牛胸 )
50 T        活性氧 ( 羥自由基 ) 測試盒 ( 比色法 )
金黃色葡萄菌 V8 蛋白酶    1mg    CAS66676-43-5
Earle 溶液    100mL    100806-100
大提柱式真菌 RNAout    5次    80904-5
0.5mL        NTP 溶液，10mM
10mg        6- 羧基二熒光素
100mg        Calcein
20L        長效期 SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )(2-30KD)
CFDA SE ( 細胞增殖示蹤熒光探針 )    5mg    22-0120-5
200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 盒裝已滅菌 )    1000 支    17-017-1000
25mg        嘌呤鹽
10 次        百萬堿基動物 DNAout
50mg        S-Methyl-ITU.sulfate(iN0S 抑制劑 )
10000U        T3 RNA 聚合酶
人魚精1試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人魚精1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人魚精1試劑盒、人魚精1 elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。
人高血樣1試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人高血樣1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人高血樣1試劑盒、人高血樣1 elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。
人血小板生成試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人血小板生成試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人血小板生成試劑盒、人血小板生成elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。