中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?；CHO-HCV-C說(shuō)明書(shū)

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。籆HO-HCV-C說(shuō)明書(shū)售后：收到細(xì)胞后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書(shū)面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)傳真致銷(xiāo)售人員，我們將盡快為您解決。

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?；CHO-HCV-C說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱(chēng) 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（亞系克?。?；CHO-HCV-C說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  CHO-HCV-C細(xì)胞整合有丙型肝炎病毒的Core基因，能穩(wěn)定表達(dá)C蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學(xué)病毒學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。 
培養(yǎng)條件  DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C15
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類(lèi)

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 羊藿素    分子式：    286.28    分子量：    C16H14O5    英文名稱(chēng)：    Herba    CAS號(hào)：    737-52-0    
 3,4-二羥基苯乙醇    分子式：    154.1632    分子量：    C8H10O3    英文名稱(chēng)：    3,4- two hydroxy benzene ethanol    CAS號(hào)：    10597-60-1    
 羅漢果甜苷V    分子式：        分子量：        英文名稱(chēng)：    Mogroside V    CAS號(hào)：        
鬼臼毒素    分子式：    414.41188    分子量：    C22H22O8    英文名稱(chēng)：    Podophyllotoxin    CAS號(hào)：    518-28-5    
 醉椒素    分子式：    230.25916    分子量：    C14H14O3    英文名稱(chēng)：    Drunk pepper    CAS號(hào)：    3155-48-4    
Z907 染料    分子式：    870.11    分子量：     C42H52N6O4RuS2    英文名稱(chēng)：    Dye 907    CAS號(hào)：    502693-09-6    
 堿性紅14    分子式：    344.47264    分子量：     C23H26N3+    英文名稱(chēng)：    Basic red 14    CAS號(hào)：    12217-48-0    
 派洛寧Y     分子式：    302.81    分子量：     C17H19N2OCl    英文名稱(chēng)：    Luoning Y    CAS號(hào)：    92-32-0    
 麝香草酚藍(lán)    分子式：    466.59    分子量：     C27H30O5S    英文名稱(chēng)：    Musk grass phenol blue    CAS號(hào)：    76-61-9    
 4-(2-THIENYL)BUT-3-EN-2-ONE    分子式：    152.21    分子量：     C8H8OS    英文名稱(chēng)：    4- (2-THIENYL) BUT-3-EN-2-ONE    CAS號(hào)：    99768-07-7    1mg    重組蛋白 A    
甘油醛 -3- 磷酸脫氫酶    CAS9001-50-7    500UN
大腸桿零誘導(dǎo)培養(yǎng)基    120517-100    100mL
10mL    胰蛋白酶抑制劑，10mg/mL    
10mL    焦碳酸二乙酯    
1g    1,4- 雙丙烯酰    
10mL    4× 核酸液相雜交液    
煙酸    CAS59-67-6    25g
小鼠 RFP 標(biāo)簽單抗    130582-1000    1000μL
5mg    植物血球凝集素 P    
25g    L- 亮氨酸    
25g    核黃素    
100mL    酚 - 混合液 (RNA 提取 )    
交聯(lián)瓊脂糖凝膠 6B    CAS62610-50-8    100mL
SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )    81203-20    20L
15 次    柱式植物葉綠體 DNAout    
10g    硫酸新    
100U    膽固醇酯酶    
100 T    GSH—ST 測(cè)試盒    
丁酰膽堿酯酶    CAS9001-08-5    500U
驢抗山羊 IgG，堿性磷酸酶標(biāo)記    131148-60    60μL
柱式血液 RNAout    71202-50    50 次
10g    N ,N- 雙 (2- 羥乙基 ) 甘氨酸    
250 mL    4% 多聚甲醛 (RNA )    
5mL    平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)因子    
5次    ECL 法地高雜交檢測(cè)試劑盒