中國倉鼠卵巢細(xì)胞；CHO-rFVIII-11說明書

中國倉鼠卵巢細(xì)胞；CHO-rFVIII-11說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱中國倉鼠卵巢細(xì)胞；CHO-rFVIII-11說明書
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件   10%FBS
傳代方法  無
傳代情況 1:3傳代，3-4天傳1次
凍存條件  C5
支原體檢測 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
STR  陰性
同工酶 
染色體  未做

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 堿性藍(lán)11    分子式：    458.05    分子量：     C29H32N3.Cl    英文名稱：    Basic Blue 11    CAS號：    2185-86-6    
二乙酸熒光素(FDA)    分子式：    416.38    分子量：     C24H16O7    英文名稱：    Two acetic acid fluorescein (FDA)    CAS號：    596-09-8    
 4-(二乙氨基)    分子式：    193.24    分子量：     C11H15NO2    英文名稱：    4- (Er Yi) water Yang aldehyde    CAS號：    17754-90-4    
 (R)-alpha-Methylaspartic acid-4-tert-butyl ester    分子式：    203    分子量：     C9H17NO4    英文名稱：    (R) acid-4-tert-butyl ester -alpha-Methylaspartic    CAS號：    1231709-25-3    
 D-果糖-1-磷酸鋇鹽    分子式：    395.45    分子量：     C6H11BaO9P    英文名稱：    D- fructose -1- phosphate    CAS號：    7865    
 聚偏氯乙烯膠乳    分子式：     C6H8N3O2R    分子量：        英文名稱：    Polyvinyl chloride latex    CAS號：        
 勞氏紫    分子式：    263.7459    分子量：     C12H10ClN3S    英文名稱：    Thionine    CAS號：    581-64-6    
 孔雀石綠    分子式：    927.01    分子量：     C52H54N4O12    英文名稱：    Malachite green    CAS號：    2437-29-8    
 Ε酸(1-萘酚-3,8-二磺酸納)    分子式：    348.26    分子量：     C10H6Na2O7S2    英文名稱：    Epsilon acid (1- two -3,8- naphthol sulfonic acid sodium)    CAS號：    83732-80-3    
 芽孢染色液    分子式：        分子量：        英文名稱：    Spore staining solution    CAS號：    67ykh    
 α-甲基丙烯酸    分子式：    86.09    分子量：     C4H6O2    英文名稱：    Alpha methyl acrylic acid    CAS號：    79-41-4    
 環(huán)丁砜    分子式：    120.17    分子量：     C4H8O2S    英文名稱：    Sulfolane    CAS號：    126-33-0 100mL    RIPA 裂解液 ( 中 )    
20μL    COX IV 兔單抗    
0.5mL    dNTP 溶液，2.5mM    
1個    0.5mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)    
Illumina 高通量 DNA 測序    D007-1    1次
Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞    130560-10    0.1mL×10
100μL    小鼠抗 T7 標(biāo)簽單抗    
25g    甲基 α-D- 吡喃甘露糖苷    
100mL    三氟    
1000 支    200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 袋裝 )    
10 管    穿刺培養(yǎng)基    
Etoposide( *泊苷 / 鬼臼乙叉苷 )    23-0240-100    100μL
柱式腐殖酸清除劑    60801-100    100 次
20L    SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )    
100 次    dNTP 和引物清除劑    
20 次    包涵體微量純化試劑盒    
50 次    植物葉綠體蛋白提取試劑盒    
固藍(lán) BB 鹽    CAS5486-84-0    5g
包涵體大量純化試劑盒    90510-2    2次
20L    長效期 SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )(>30KD)    
50 次    兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)