犬腎細胞系/IgR；MDCK/IgR說明書

犬腎細胞系/IgR；MDCK/IgR說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 犬腎細胞系/IgR；MDCK/IgR說明書
形態(tài)特性  上皮細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞為MDCK細胞的克隆系。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C6
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液。控制吹打的力度，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

 高效氯氟氰菊酯    分子式：    449.85    分子量：     C23H19ClF3NO3    英文名稱：    High efficiency chlorine and fluorine    CAS號：    91465-08-6    
 (S,S)-2-氮雜雙環(huán)[3,3,0]辛烷-3-羧酸芐酯鹽酸鹽    分子式：    281.78    分子量：     C15H20ClNO2    英文名稱：    (S, S) -2- azabicyclo [3,3,0] octane -3- carboxylic acid benzyl ester hydrochloride    CAS號：    93779-29-4    
 甜菊雙糖甙    分子式：    642.734    分子量：    C32H50O13    英文名稱：    Steviolbioside    CAS號：    41093-60-1    
 梔子甙    分子式：    388.37    分子量：    C17H24O10    英文名稱：    Gardenia    CAS號：    24512-63-8    
 楊梅素    分子式：    318.2351    分子量：    C15H10O8    英文名稱：    Red pigment    CAS號：    529-44-2    
 五味子甲素    分子式：    416.50728    分子量：    C24H32O6    英文名稱：    A vegetarian    CAS號：    61281-38-7    
 人參皂苷Re    分子式：    947.15388    分子量：    C48H82O18    英文名稱：    Ginsenoside Re    CAS號：    52286-59-6    
 牡荊素-2-O-鼠李糖苷    分子式：    578.52    分子量：    C27H30O14    英文名稱：    Vitexin rhamnoside -2-O-    CAS號：    64820-99-1    
 黃楊酮堿    分子式：    371.55608    分子量：    C24H37NO2    英文名稱：    Boxwood base ketone    CAS號：    4236-73-1    
 番瀉苷 B    分子式：    862.73912    分子量：    C43H38O20    英文名稱：    The B    CAS號：    128-57-4    
 白花前胡素D     分子式：    426.4624    分子量：    C24H26O7    英文名稱：    White flowers D    CAS號：        
 蘇丹紅7B    分子式：    379.46    分子量：     C24H21N5    英文名稱：    Tonyred 7B    CAS號：    6368-72-5    
 7-氯靛紅    分子式：    181.58    分子量：     C8H4ClNO2    英文名稱：    7- isatin chloride    CAS號：    7477-63-65g    亮綠 SF( 淡黃 )   5mg    生物素化兔 IgG    
肝素    CAS9041-08-1    1g
硫酸卡那干粉    60302-1    1g
1mg    乙酰輔酶 A    
25g    結(jié)晶紫    
1mg    金黃色葡萄 V8 蛋白酶    
100U    Therminator II DNA 聚合酶    
木瓜蛋白酶    CAS9001-73-4    5g
CM 交換介質(zhì)    130422-50    50mL
10 次    質(zhì)譜兼容型蛋白銀染試劑盒    
500mL    L-15 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )    
500 U    天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶    
20 次    雙染細胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-EGFP·PI）    
四鹽酸精胺    CAS306-67-2    1g
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH)    81212B-30    30 次
100 次    總抗氧化能力檢測試劑盒 (FRAP 法 )    
1mL    綠如藍染料，PCR     
1g    肝素鋰    
100 次    谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒    
卵白蛋白    CAS9000-96-8    1g
β- 乙醇，電泳    100841-1.5    1.5mL
植物 RNA 提取高鹽溶液    140402-100    100mL