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詳細(xì)介紹
兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞；RCFBF說(shuō)明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 兔角膜前基質(zhì)層成纖維細(xì)胞；RCFBF說(shuō)明書
形態(tài)特性 成纖維樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 北京眼科研究所建系細(xì)胞。
培養(yǎng)條件 F12: Ham's F12 Nutrient Mixture 5%FBS
傳代方法 1:3傳代；2~3天1次。
傳代情況 P8
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
酸性湖藍(lán)V 分子式： 566.66 分子量： C27H31N2NaO6S2 英文名稱： Alphaurine V CAS號(hào)： 129-17-9
甲基藍(lán) 分子式： 799.8 分子量： C37H27N3Na2O9S3 英文名稱： Methyl blue CAS號(hào)： 28983-56-4-
二氯二茂鋯 分子式： 292.32 分子量： C10H10Cl2Zr 英文名稱： Two CL two CAS號(hào)： 1291-32-3
1-萘甲基胺 分子式： 157.22 分子量： C11H11N 英文名稱： 1- naphthalene CAS號(hào)： 118-31-0
5-硝基-6-氯代甲苯-3-磺酸鈉鹽 分子式： 分子量： 英文名稱： 5- nitro -6- -3- sulfonic acid sodium salt CAS號(hào)：
煌橙 分子式： 350.32 分子量： C16H11N2NaO4S 英文名稱： Brilliant orange CAS號(hào)： 1934-20-9
1,5-萘二磺酸鈉 分子式： 332.25334 分子量： C10H6Na2O6S2 英文名稱： 1,5- naphthalene two sulfonic acid CAS號(hào)： 1655-29-4
4-氟-7-硝并-2-氧雜-1,3-二唑(NBD-F) 分子式： 183.1 分子量： C6H2FN3O3 英文名稱： 4- -7- -1,3- and -2- two (NBD-F) CAS號(hào)： 29270-56-2
1,3-二氯-2-丙醇 分子式： 128.98 分子量： C3H6Cl2O 英文名稱： 1,3- two -2- CAS號(hào)： 96-23-1
二乙二醇二乙 分子式： 162.23 分子量： C8H18O3 英文名稱： Diethylene glycol ether two CAS號(hào)： 112-36-7
芴 分子式： 166.22 分子量： C13H10 英文名稱： Fluorene CAS號(hào)： 86-73-7 50 次 柱式凋亡 DNAout
1mL HB101 種
Therminator γ DNA 聚合酶 130617-200 200U
電泳二甲苯藍(lán) FF 溶液，1% 100934-10 10mL
1000U T4 RNA 連接酶
25mg 蛋白酶 K
100mL 增強(qiáng)型 DAB 顯色試劑盒
100μL 小鼠抗 MBP 標(biāo)簽單抗
Xa 因子蛋白酶 120507-50 50μg
dTTP 溶液，2.5mM 130913-2 2mL
0.83nmol 通用 miRNA 克隆接頭
50mL 二甲基亞砜 ( 細(xì)胞培養(yǎng) )
30 次 一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒
20 次 DNA 去磷酸化試劑盒
瓊脂粉 CAS9002-18-0 100g
轉(zhuǎn) ESPES 基因植物 PCR Mix 131129L-100 100 次
50 次 細(xì)胞核蛋白提取試劑盒
250g 干粉型 SOC 培養(yǎng)基
1g 二磷酸苷二
10 次 柱式醬油 DNAout
L- 胱氨酸 CAS56-89-3 25g
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