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詳細(xì)介紹
豬睪丸細(xì)胞懸浮適應(yīng)株；ST-2014S說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 豬睪丸細(xì)胞懸浮適應(yīng)株；ST-2014S說明書
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏，其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
5g β- 硫代巴比妥酸
100mL MAL 指示劑培養(yǎng)基
25mg S(-) 雷氯必利 (+)- 酒石
100 次 胎盤堿性磷酸酶檢測試劑盒
800U Bst DNA 聚合酶，大片段
戊二醛磷酸緩沖固定液 131278-250 250 mL
96 孔板病毒 RNAout( 真空法 ) 131191-1 1次
25mg 尿苷 -5'- 二磷酸
1次 96 孔板病毒 RNAout( 離心法 )
10mg DiO( 細(xì)胞膜綠色熒光探針 )
1g 溶壁酶干粉
Fluo-3AM( 鈣離子熒光探針 ) 22-0300-250 250μL
非凍型尿液 DNA 保存液 90315-15 15mL
50 次 葡萄球 RNAout
500mg 崩潰酶 大鼠輸尿管上細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
氰化高鐵血紅蛋白參比液(4種×2套) /Cyanomethemoglobin reference solution 國產(chǎn)/進(jìn)口 10毫升×8支
WPMY-1(人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（不含瓊脂）/需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基/Thioglycollate Medium（Without Agar） 用于產(chǎn)氣莢膜梭菌確證試驗的細(xì)菌培養(yǎng)（GB、SN標(biāo)準(zhǔn)） 國產(chǎn)/進(jìn)口 250克
SDS-PAGE濃膠緩沖液(4x) 200ml 國產(chǎn)
MDA-MB-436(人腺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
NCI-H838(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 gersion
Y1(Y-1) (小鼠腎上腺質(zhì)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
HL-60(人早幼粒急性白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
胰腺腺 英文名稱： Panc10.05
麥康凱瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/麥康克瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/MacC 革蘭氏陰性菌的分離培養(yǎng)(抑制變形桿菌蔓延) 國產(chǎn)/進(jìn)口 250克
KATO III(人胃細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人前列腺平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
H4-IIE(大鼠肝細(xì)胞 ) 5×106cells/瓶×2
1mg Z-VAD-FMK(Caspase Inhibitor)
600U 核糖核酸酶 H
大鼠內(nèi)皮細(xì)胞分離液 1.066 120892-200 200mL
土壤 DNAout 60701-100 100 次
0.1mL×10 Rosetta(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞
1g 潮 B
100 次 液相內(nèi)毒素清除劑
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