豬睪丸細(xì)胞；ST說明書

豬睪丸細(xì)胞；ST說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 豬睪丸細(xì)胞；ST說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞為二倍體，對豬細(xì)小病毒、腸道病毒敏感。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3-1:8，每周換液2次
傳代情況 P120
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

UM-UC-3(人膀胱移行細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
胰月示-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂基礎(chǔ)/TSC瓊脂/TSC Agar    產(chǎn)氣莢膜梭菌的平板計(jì)數(shù)    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元                
HS 683(人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H23(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
小鼠海馬神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞（EGFP標(biāo)記）                
水楊苷發(fā)酵管    BR    國產(chǎn)/進(jìn)口    20支    
Hacat(人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
G-401(人腎Wilms細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
MuM-2C(人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
S-180(小鼠肉瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
Inclusion body Denature Reagent/包涵體蛋白溶解液    100ml        國產(chǎn)    
COLO 205(人結(jié)腸細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
G-401(人腎Wilms細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠胎兒表角質(zhì)形成層細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
BCA蛋白定量試劑盒    500次        國產(chǎn)    
小鼠成纖維細(xì)胞    英文名稱：        3T3    
胰酶細(xì)胞消化液(含酚紅)    規(guī)格：        100ml  1mL    植物蛋白酶抑制劑    
綠豆核酸酶    120408-1000    1000U
雜交袋    90206-20    20 個
50L    Tricine-SDS-PAGE 陰極電泳液 ( 干粉 )    
100 次    動物種屬鑒定 PCR Mix 4    
50 次    DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (3)φX174 DNA/Hae Ⅲ    
100U    DNA 促旋酶 (E.coli)    
D- 甘露醇    CAS69-65-8    250g
十二烷基磺酸    131049-100    100g
50 次    柱式水樣 DNAout    
10mg    莽草酸    
100g    矮壯素    
100mL    RNase-free CTAB 溶液 ,20%    
1mL    Y187 酵母種    
ATP 依賴的 DNase    120510-200    200U
環(huán)狀 DNA 全基因組擴(kuò)增試劑盒    100947-30    30 次
10mL    微量核酸沉淀劑    
1g    Hemoglobin(NO 清除劑 )    
5g    D(+) 木糖    
250 mL    Zamboni 固定液    
維生素 B1    CAS59-43-8    10g
成骨細(xì)胞生長因子    21-0010-5     5mL