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詳細(xì)介紹
豬腎細(xì)胞；LLC-PK1說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 豬腎細(xì)胞；LLC-PK1說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞源自3~4周齡的Hampshire豬腎組織，可產(chǎn)生纖溶酶原激活物。
培養(yǎng)條件 M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS) 3%FBS
傳代方法 1:3~1:6傳代；2~3天1次。
傳代情況 C6
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR -
同工酶
染色體 32~40
使用權(quán)限 A類(lèi)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
dATP 溶液，100mM 120615-0.5 0.5mL
500g 鐵氰化
100mL 二甲基亞砜
100 次 一步式胞漿蛋白微量制備試劑盒
10 次 小 RNA 克隆試劑盒
3- 氨基 -9- 乙基咔唑 CAS132-32-1 5g
植物種屬鑒定 PCR Mix 11 131129K-100 100 次
50 次 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（Annexin V-PE）
250g 干粉型 SOB 培養(yǎng)基
10mL 焦碳酸二乙酯
5次 大提柱式 Ti 質(zhì)粒 DNAout
L- 半胱氨酸 CAS52-90-4 25g
HB101 種 12-47 1mL
100mL YPDG 液體培養(yǎng)基
1mL 環(huán)孢 A 溶液 ,10mg/mL
10g 茚三酮
20 次 天凈沙 SPIA 擴(kuò)增試劑盒 ( 用于擴(kuò)增 DNA 模板 )
糖原Ⅲ型 CAS9005-79-2 500mg
氨芐青干粉 60101-1 1g
100mg 遺傳
50 次 酵母 DNAout
1g 3,3’,5,5’- 四甲基聯(lián)苯胺二鹽酸
人大腸細(xì)胞 英文名稱： PA319
桔汁瓊脂/Orange Serum Agar 飲料中耐酸細(xì)菌的分離培養(yǎng) 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 250克
大鼠小腸血管內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
強(qiáng)化梭菌瓊脂/RCA/RCM Agar 梭菌的分離培養(yǎng) 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 250克
YAC-1(小鼠淋巴瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
羊膽鹽/Bile salt from sheep BR 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 25克
SF767(人腦瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
NCI-H1688(人典型小細(xì)胞肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
NC膜(0.22um) 30cm × 3m，15cm x 20cm gersion 30cm × 3m，15cm x 20cm
A2(人腺樣囊性細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
LS 180(人結(jié)腸腺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
HSC-T6(大鼠肝星形細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
HCT116/人結(jié)腸細(xì)胞 株 國(guó)產(chǎn)
植物蛋白提取試劑（帶酶抑制劑） 100次 國(guó)產(chǎn)
Calu-3(人肺腺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
Hce-8693(人盲腸腺細(xì)胞(未分化)) 5×106cells/瓶×2
CLED培養(yǎng)基添加劑/CLED Medium Supplement 加入100mlC.L.E.D培養(yǎng)基中 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 1毫升×5支
小細(xì)胞肺 英文名稱： NCI-H345（懸浮）
C127(小鼠腺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
小鼠肝細(xì)胞 英文名稱： H22
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