小耳豬肺細(xì)胞；SEP-L2說(shuō)明書(shū)

小耳豬肺細(xì)胞；SEP-L2說(shuō)明書(shū)售后：收到細(xì)胞后7天，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題（如污染，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)，應(yīng)出具書(shū)面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)傳真致銷(xiāo)售人員，我們將盡快為您解決。

小耳豬肺細(xì)胞；SEP-L2說(shuō)明書(shū)【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱(chēng) 小耳豬肺細(xì)胞；SEP-L2說(shuō)明書(shū)
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞系來(lái)源于一雄性小耳豬的肺組織。1988年由中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。 
培養(yǎng)條件  M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 B類(lèi)

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶(hù)手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶(hù)提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

人永生化角質(zhì)細(xì)胞    英文名稱(chēng)：        Hacat    
EB增菌肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)/EB增菌液/EB Enrichment Broth Medium    單核細(xì)胞增生李氏特菌增菌    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
V-P半固體瓊脂/Voges-Proskauer Semisolid Agar    細(xì)菌V-P試驗(yàn)    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
肌醇測(cè)定培養(yǎng)基/Inositol Assay Broth    嬰幼兒配方食品和粉中肌醇測(cè)定    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
大鼠主動(dòng)脈內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
品紅亞硫酸鈉瓊脂/Fuchsin Basic Sodium Sulfite Agar    飲用水,水源中總大腸菌群的選擇性分離和確認(rèn)    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
大鼠成肌細(xì)胞    英文名稱(chēng)：        L6    
小牛血清/Calf serum    診斷試劑用    國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口    200毫升    
SNU-5(人胃細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H446(人小細(xì)胞肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
OS-RC-2(人腎細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
HELF(人胚肺成纖維細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
MDA-MB-175VII(人腺導(dǎo)管細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
Lncap clone FGC(人前列腺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2DNA 提取技術(shù)服務(wù)    D001-1    1 個(gè)樣
酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備試劑盒    81201-20    20 次
100μL    小鼠抗 GFP 標(biāo)簽單抗    
20 次    即用型藍(lán)白 T 載體 E 型 ( 無(wú)啟動(dòng)子，無(wú) MCS)    
25g    N-2- 羥乙基 -N’-2- 乙基磺酸    
2000U    EcoRI    
100mL    杜氏 PBS 緩沖液 ,10×    
Actinomycin D( 基因轉(zhuǎn)錄抑制劑 )    23-0060-1    1mg
微量樣品核酸提取試劑盒    80930-50    50 次
1.5mL    溶酶溶液，10mg/mL    
10mL    DNA 溶解液    
50 次    蛋白膠微量回收試劑盒    
5mg    硫氧還蛋白    
二硫蘇糖醇 (DTT)    CAS3483-12-3    5g
植物總蛋白質(zhì)微量提取試劑盒 (SDS-PAGE)    81218-30    30 次
10 次    預(yù)染蛋白質(zhì)電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (14.4-97.4KD)    
100 次    抗干擾 Taq DNA 聚合酶    
10g    次(亞)甲基蘭    
20 次    克必隆零背景 T 載體    
聚乙二醇溶液    CAS25322-68-3    25mL
蛋白磷酸酶抑制劑混合液 1    80809-1    1mL
50 次    柱式動(dòng)物 RNA-DNA 雙提試劑盒