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荷斯坦奶牛胎兒成纖維細胞;Human Cell line 1D3說明書

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更新時間:2017-01-23 14:11:34瀏覽次數(shù):343

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產(chǎn)品簡介

荷斯坦奶牛胎兒成纖維細胞;Human Cell line 1D3說明書售后:收到細胞后7天,如發(fā)現(xiàn)細胞有質(zhì)量問題(如污染,死亡,快遞運輸?shù)仍颍r,應(yīng)出具書面質(zhì)量問題報告并及時傳真致銷售人員,我們將盡快為您解決。

詳細介紹

荷斯坦奶牛胎兒成纖維細胞;Human Cell line 1D3說明書【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 荷斯坦奶牛胎兒成纖維細胞;Human Cell line 1D3說明書
形態(tài)特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C4
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理:
1、復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,應(yīng)將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,100%保證5代以內(nèi),活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,導(dǎo)致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液。控制吹打的力度,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng)。

Dami(人巨核細胞白血病細胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠膚成纖維樣細胞    英文名稱:        MouseS    
Acc-2(人涎腺腺樣囊性細胞)    5×106cells/瓶×2            
透明質(zhì)酸酶(含10mL酶解緩沖液)    1mL            
3.5% NaC1葡萄糖磷酸鹽胨水發(fā)酵管    BR    國產(chǎn)/進口    20支    
人腎細胞    英文名稱:        Ketr-3    
O157顯色培養(yǎng)基配套平皿/大腸桿菌O157顯色培養(yǎng)基配套平皿/O157 Chromogenic Medium Dish        國產(chǎn)/進口    9㎝/塊    
人間充質(zhì)干細胞-臍帶                
副溶血性弧菌增菌液    副溶血性弧菌的增菌培養(yǎng)    國產(chǎn)/進口    250克    
猴胚胎腎上細胞    英文名稱:        Marc145    
馬鈴薯葡萄糖瓊脂/PDA瓊脂/Potato Dextrose Agar    霉菌分離培養(yǎng)和霉菌酵母菌計數(shù)    國產(chǎn)/進口    250克    
NCI-H2227(人小細胞肺細胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
人支氣管上細胞    英文名稱:        BEAS-2B    
豬膽鹽/Bile salt from pig    BR,65%    國產(chǎn)/進口    25/1000克    
肺腺    英文名稱:        GLC-82    
米勒-海頓肉湯/MH肉湯/酪蛋白肉湯/水解酪蛋白肉湯/MHB    用于抗菌素藥物敏感性試驗    國產(chǎn)/進口    250克    
大鼠骨髓基質(zhì)細胞*培養(yǎng)基    100mL            
無菌雞血清/Sterile Defidrinated Chicken Blood    BR    國產(chǎn)/進口    100/400毫升    
SW 982(人滑膜肉瘤細胞)    5×106cells/瓶×2 100U    膽固醇酯酶    
100 T    GSH—ST 測試盒    
丁酰膽堿酯酶    CAS9001-08-5    500U
驢抗山羊 IgG,堿性磷酸酶標(biāo)記    131148-60    60μL
柱式血液 RNAout    71202-50    50 次
10g    N ,N- 雙 (2- 羥乙基 ) 甘氨酸    
250 mL    4% 多聚甲醛 (RNA )    
5mL    平滑肌細胞生長因子    
5次    ECL 法地高雜交檢測試劑盒    
前脂肪細胞生長因子    21-0280-5     5mL
RNase-free Tris HCl,1M,pH 8.5    80918-100    100mL
100U    Pfu DNA 聚合酶    
500 次    BCA 法蛋白定量試劑盒    
20mg    L-Canavanine(iNOS 抑制劑 )    
30mL    天凈沙核酸濃縮劑    
L-Glutathione (reduced form)( 抗氧化劑 )    23-0400-1    1g
柱式植物 DNAout    60602-50    50 次
10mL    RNA  DEPC ( 焦碳酸二乙酯 )    
2 μg    Cre/Lox 系統(tǒng)載體系列    
5mL    dNTP 溶液,100mM     
1個    4mL DNA 離心超濾管 (9-15 KD)    
熒光法死細胞檢測試劑盒    140633-1000    1000 次
氨基磁珠    130515-2    2mL       

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