新生牛眼晶體上皮細胞；NBLE說明書

新生牛眼晶體上皮細胞；NBLE說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 新生牛眼晶體上皮細胞；NBLE說明書
形態(tài)特性  多角
生長特性 貼壁生長
特征特性  北京眼科研究所建系細胞。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  20～30%FBS
傳代方法  1:2傳代；3~4天1次。
傳代情況 P4
凍存條件  基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  -
同工酶 
染色體  
使用權限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

Hep G2(人肝細胞)    5×106cells/瓶×2            
Candida Elective 瓊脂/BiGGY瓊脂/坎迪達尼克森選擇性瓊脂/鉍甘氨酸葡萄糖酵母瓊脂/BiGGY Agar    食品中Candida及酵母菌總數(shù)測定    國產(chǎn)/進口    250克    
Tissue Protein Extraction Reagent/組織蛋白抽提試劑    25次、100次        國產(chǎn)    
一步法Western封閉液    100ml        100ml    
Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴細胞白血病細胞)    5×106cells/瓶×2            
WB-F344(大鼠肝上樣干細胞)    5×106cells/瓶×2            
GoldCassette-GST/GST重組標簽蛋白快速檢測試劑盒(精裝)    2次、10次        2次、10次    
小鼠胰島細胞*培養(yǎng)基    100mL            
BPH-1, 人前列腺增生細胞                
小鼠肺細胞    英文名稱：        LLC    
Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)    規(guī)格：        3000次    
人小梁網(wǎng)細胞*培養(yǎng)基    100mL            
LB Lennox瓊脂/LB Lennox Agar    BR    國產(chǎn)/進口    250克    
人腦微血管內(nèi)細胞    英文名稱：        HBMEC    
丙二酸鈉培養(yǎng)基/丙二酸鹽培養(yǎng)基/Malonate Broth    用于測定腸道細菌對丙二酸鹽的利用試驗    國產(chǎn)/進口    10克    
人成巨核細胞白血病細胞    英文名稱：        MEG-01    
菌種保存培養(yǎng)基/Strain Store Medium    常用細菌斜面?zhèn)鞔?nbsp;   國產(chǎn)/進口    250克    100mL    三氟    
1000 支    200 μL RNase-free 黃吸頭 ( 袋裝 )    
10 管    穿刺培養(yǎng)基    
Etoposide( *泊苷 / 鬼臼乙叉苷 )    23-0240-100    100μL
柱式腐殖酸清除劑    60801-100    100 次
20L    SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )    
100 次    dNTP 和引物清除劑    
20 次    包涵體微量純化試劑盒    
50 次    植物葉綠體蛋白提取試劑盒    
固藍 BB 鹽    CAS5486-84-0    5g
包涵體大量純化試劑盒    90510-2    2次
20L    長效期 SDS-PAGE 電泳液 ( 干粉 )(>30KD)    
50 次    兩管式 RT-PCR 試劑盒 (MMLV-Taq)    
1個    15mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD)    
2mg    BAY11-7082(NF-κB 抑制劑 )    
1g    硫酸葡聚糖    
總抗氧化能力檢測試劑盒 (ABTS 快速法 )    18-0760-100    100 次
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )    70904A-1.5    1.5mL
200U    Therminator DNA 聚合酶    
250mL    非凍型組織 RNA 保存液    
25g    疊氮    
100 次    植物種屬鑒定 PCR Mix 5    
麗春紅 S    CAS6226-79-5    10g
BCIP/NBT 顯色試劑盒    81224-100    100mL
非酶 DNA 清除劑 -2    70801-15    15 次