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大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞；BOS-6說(shuō)明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 大額牛與婆羅門牛雜交F1代皮膚成纖維樣細(xì)胞；BOS-6說(shuō)明書
形態(tài)特性 成纖維細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)源于一雌性大額牛與婆羅門牛雜交F1代的耳部皮膚組織，2010年由中科院昆明細(xì)胞庫(kù)建立。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法（-）
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
大鼠角膜內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
小鼠骨肉瘤 英文名稱： LM-8
人膀胱細(xì)胞 英文名稱： 5637
人胰腺氟尿嘧啶耐藥 英文名稱： PATU-8988/FU
ER培養(yǎng)基/Eriksson Medium BR 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 10升
人破骨細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
WORT瓊脂/WORT Agar 用于真菌,特別是酵母菌的計(jì)數(shù)和增菌培養(yǎng) 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 250克
人肺紫杉醇耐藥株 英文名稱： A549/ Taxol
堿性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ)/Alkaline L-G medium Base 酸性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標(biāo)本 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 250克
大鼠真成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
葡萄糖銨發(fā)酵管 BR 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 20支
大鼠腸靜脈內(nèi)細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
選擇性巧克力平板/Selectivity chocolate Plate 國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口 10塊
SKOV3 [SK-OV-3], 人卵巢腺細(xì)胞系
NCI-H2170(人肺鱗細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
Nuclei蛋白抽提試劑盒（帶酶抑制劑） 50次 gersion 國(guó)產(chǎn)
EA.hy926(人臍靜脈細(xì)胞融合細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 多聚半乳糖醛 CAS9049-37-0 1g
蛋白磷酸酶抑制劑混合液 2 130525-1 1mL
250 次 柱式動(dòng)物 RNAout
50g 酪蛋白
20Ku 脲酶 ( 尿素酶 巨豆 )
50 mL 親和層析柱
三氯 CAS76-03-9 100g
pNPP 干粉 131116-1 1g
30μL β-Actin 小鼠單抗
500mL MEM 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 +10% 小牛血清 )
5g 1- 萘胺
20 T 乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶測(cè)試盒
50 次 玻璃珠法柱式真 DNAout
Karnovsky 固定液 131226-250 250 mL
一站式磁珠法植物 mRNAout 130973-50 50 次
2mL 鎳柱介質(zhì)
20μL Ac-DEVD-FMK(Caspase3Inhibitor)
1mg Indo-1 AM
30 次 單孢子全基因組擴(kuò)增試劑盒
JC-10 22-0420-5 5mg
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