非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4A；Vero-HCV-NS4A說明書

非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4A；Vero-HCV-NS4A說明書【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

細胞名稱 非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4A；Vero-HCV-NS4A說明書
形態(tài)特性  上皮樣細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性  Vero-HCV-NS4A細胞整合有丙型肝炎病毒的NS4A基因，能穩(wěn)定表達NS4A蛋白，是HCV基礎(chǔ)研究的*摸型。它由武漢大學(xué)病毒學(xué)國家重點實驗室郭佳博士于2008年構(gòu)建并保存。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C24
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。   細胞到達客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細胞瓶，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

SK-NEP-1(人腎母細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2
溝腸桿菌 Enterobacter cloacae
紫褐小單孢菌 Micromonospora violaceofusca
雞胚成纖維細胞英文名稱：DCE
人間充質(zhì)干細胞-臍帶 Human
異常畢赤酵母 Pichia anomala
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
HFT-8810(人胎兒胸腺細胞株)5×106cells/瓶×2
瑞氏青霉 Penicillium raistrickii
刺孢吸水鏈霉菌 Streptomyces hygrospinosus
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞（未分化）英文名稱：PC-12（未分化）
檸檬形克勒克酵母 Kloeckera apiculata
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
MSTO-211H(人肺細胞)5×106cells/瓶×2
泡盛曲霉 Aspergillus awamori
淡紫擬青霉 Paecilomyces lilacinus
Hep B1.2(人肝細胞)5×106cells/瓶×2
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
球孢白僵菌 Beauveria bassiana
大鼠軟骨細胞*培養(yǎng)基100mL
酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp.lactis
綠色木霉
小鼠畸胎瘤細胞英文名稱：P19250mL    二甲基二氯硅烷    
500U    MboI    
250g    干粉型 SB 培養(yǎng)基    
Cycloheximide    23-0200-50    50mg
凝膠法內(nèi)毒素半定量試劑盒    130504-10    10x0.1mL
1000U    SalI    
50 支    DNA 樣品采樣拭子     
0.1mL×10    BL21(DE3) 化學(xué)感受態(tài)細胞    
50 次    磷酸化蛋白純化試劑盒    
紅    CAS114-07-8    1g
ConA 糖蛋白分離試劑盒    131067-10    10 次
1個    雜交管 (35×300mm)    
100mg    鏈脲佐素    
5μg    10nt 隨機引物，0.5μg/μL    
20μL    Ac-LEHD-FMK(Caspase9Inhibitor)    
25μL    Fluorescein-12-dUTP 溶液，1mM    
總谷胱甘肽過氧化物酶檢測試劑盒    18-0720-100    100 次 
SSC 溶液 ,20×    100405-100    100mL
100U    Tfl DNA 聚合酶    
100mL    非凍型血液 RNA 保存液