小鼠浦肯野細(xì)胞

培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

產(chǎn)品屬性：

名稱    小鼠浦肯野細(xì)胞
2.組織來源：小腦組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

小鼠浦肯野細(xì)胞分離自小腦皮質(zhì)組織；小腦的表面被覆著一層灰質(zhì)，叫小腦皮質(zhì)，小腦皮質(zhì)分為3層，從表及里分別為分子層、浦肯野細(xì)胞層和顆粒細(xì)胞層。皮質(zhì)里含有星狀細(xì)胞、籃狀細(xì)胞、浦肯野細(xì)胞、高爾基細(xì)胞和顆粒細(xì)胞等5種神經(jīng)元。浦肯野細(xì)胞發(fā)出的軸突組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維，終止于小腦白質(zhì)內(nèi)的神經(jīng)核。浦肯野細(xì)胞（Purkinje cell）是從小腦皮質(zhì)發(fā)出的能夠傳出沖動(dòng)的神經(jīng)元。人的小腦皮質(zhì)約有1500萬個(gè)浦肯野細(xì)胞。浦肯野細(xì)胞還廣泛分布于心室。顯著的電生理特點(diǎn)是傳導(dǎo)性強(qiáng)，傳導(dǎo)速度快，可達(dá)4000mm/s。屬快反應(yīng)自律型細(xì)胞，具有舒張期自動(dòng)除極化的性能，因而有自律性，但自律性強(qiáng)度明顯低于竇房結(jié)P細(xì)胞。這類細(xì)胞常常平行排列，細(xì)胞內(nèi)電阻低，只有心室細(xì)胞的1/3。小腦：浦肯野細(xì)胞是小腦皮質(zhì)中大的神經(jīng)元，細(xì)胞體呈梨形，頂端發(fā)出2~3條粗大的主樹突，向外伸入分子層。主樹突沿途分支繁茂，形如展開的、扁薄的扇形，鋪展在與小腦葉片長軸垂直的平面上。樹突分支上有大量的樹突棘，與傳入纖維構(gòu)成廣泛的突觸聯(lián)系，接受傳入小腦的全部信息。軸突由細(xì)胞底部（與主樹突相對方向）發(fā)出，細(xì)長，離開胞體不遠(yuǎn)便形成有髓神經(jīng)纖維，向內(nèi)經(jīng)顆粒層離開皮質(zhì)進(jìn)入白質(zhì)，組成小腦皮質(zhì)的傳出纖維，終止于小腦內(nèi)部的神經(jīng)核團(tuán)。一個(gè)浦肯野細(xì)胞的軸突約形成500個(gè)終末膨大，約與小腦深部核團(tuán)的35個(gè)神經(jīng)元形成突觸。心臟浦肯野細(xì)胞常常平行排列，幾個(gè)細(xì)胞互相以漿膜連接排成一個(gè)小束，小束外包繞著基底膜。細(xì)胞內(nèi)含肌原纖維很少，胞漿區(qū)內(nèi)充滿糖原顆粒、線粒體和肌漿網(wǎng)，細(xì)胞內(nèi)電阻低，只有心室細(xì)胞的1/3。浦肯野細(xì)胞內(nèi)無橫管系統(tǒng)，但膜電容比收縮細(xì)胞大，可能是由于其閏盤結(jié)構(gòu)廣泛而復(fù)雜，提供了較大的表面積的緣故。浦肯野細(xì)胞閏盤的主要成分是縫隙連接，粒著膜占的比例很少，這些可能是構(gòu)成浦肯野細(xì)胞傳導(dǎo)快的形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠浦肯野細(xì)胞采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠浦肯野細(xì)胞經(jīng)Neph3免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含脂質(zhì)濃縮液、BSA、Monothioglycerol、Transferrin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 神經(jīng)元細(xì)胞樣

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
兔抗 GST 標(biāo)簽多抗20μL  RNA 級 Tris Base( 三羥甲基氨基 )100g

HRP 標(biāo)記的兔抗 GST 標(biāo)簽多抗20μL  RNA 級 SDS( 十二烷基硫酸 )100g

一站式 MBP 標(biāo)簽蛋白純化套裝20 次  RNA 級 Sarkosyl( 月桂酰 -N- 甲基氨基乙酸 ) 100g

小鼠抗 His 標(biāo)簽單抗100μL  RNA 級 PVP K30( 聚乙烯基烷酮 K30) 100g

小鼠抗 His 標(biāo)簽單抗1000μL  RNA 級 Oligo(dT) 纖維素25mg
人α1抗胰糜(AACT)elisa分析檢測試劑盒

人α1抗(α1-AT)elisa分析檢測試劑盒

人α1防御素(DEFA1)elisa分析檢測試劑盒

人α1β糖蛋白(α1β-GP)elisa分析檢測試劑盒

人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)elisa分析檢測試劑盒
小鼠浦肯野細(xì)胞小鼠蛋白激酶Cζ(PKCζ)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶Cη(PKCη)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶D1(PRKD1)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶N2(PKN2)elisa檢測試劑盒

小鼠蛋白激酶抑制因子β(PKIβ)elisa檢測試劑盒

冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。