牙髓干細胞 返回列表頁

產品屬性：

組織來源：牙髓組織

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

細胞簡介：

人牙髓干細胞分離自滑膜組織；牙髓組織位于牙齒內部的牙髓腔內。牙髓腔的外形與牙體形態(tài)大致相似，牙冠部髓腔較大，稱髓室，牙根部髓腔較細小，稱根管，根尖部有小孔，稱根尖孔。牙髓組織主要包含神經、血管，淋巴和結締組織，還有排列在牙髓外周的造牙本質細胞，其作用是造牙本質。牙髓因受到病源刺激物的作用不同以及機體抵抗力的差異，出現不同的病理變化，在臨床上會表現為一系列不同的癥狀和體征。牙髓充血狀況持續(xù)時間較長后，轉化為急性牙髓炎癥。間充質干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）來源于胚胎時期的中胚層組織，具有很強的自我復制和多向分化潛能，具有向脂肪細胞、成骨細胞、軟骨細胞及肌細胞等多種終末細胞定向分化的能力，運用 MSCs來修復軟骨損傷具有很好的應用前景，目前已能夠從骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉等組織以及羊水、臍帶、臍帶血中分離和制備間充質干細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的采用膠原酶消化法、低密度稀釋克隆制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的經CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3-5代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30分鐘*） → -80 ℃16~18小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase長期儲存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20 ℃不可超過1小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

培養(yǎng)操作：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入 10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml ，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

實驗報告：

產品僅用于科研：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4mL酶消化液（0.1%和0.1%I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10%FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)。
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4%BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗，37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
血管緊張素Ⅱ抗體

血管緊張素Ⅱ受體1抗體

血管生成素-1抗體

血管生成素樣蛋白2抗體

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