詳細(xì)介紹
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1192 |
名稱 源NK細(xì)胞
2.組織來源:外周血
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡介:
人NK細(xì)胞分離自人外周血單個核細(xì)胞;NK細(xì)胞即自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK)是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞,不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān),而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生,能夠識別靶細(xì)胞、殺傷介質(zhì)。NK細(xì)胞來源于骨髓淋巴樣干細(xì)胞,其分化、發(fā)育依賴于骨髓及胸腺微環(huán)境,主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴結(jié)。NK細(xì)胞不同于T、B細(xì)胞,是一類無需預(yù)先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的淋巴細(xì)胞。由于NK細(xì)胞的殺傷活性無MHC限制,不依賴抗體,因此稱為自然殺傷活性。NK細(xì)胞胞漿豐富,含有較大的嗜天青顆粒,顆粒的含量與NK細(xì)胞的殺傷活性呈正相關(guān)。NK細(xì)胞作用于靶細(xì)胞后殺傷作用出現(xiàn)早,在體外1小時、體內(nèi)4小時即可見到殺傷效應(yīng)。NK細(xì)胞的靶細(xì)胞主要有某些腫瘤細(xì)胞(包括部分細(xì)胞系)、病毒感染細(xì)胞、某些自身組織細(xì)胞(如血細(xì)胞)、寄生蟲等,因此NK細(xì)胞是機(jī)體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素,也參與第Ⅱ型超敏反應(yīng)和移植物抗宿主反應(yīng)。
5.方法簡介:
公司實驗室分離的人外周血NK細(xì)胞采用取外周血、通過密度梯度離心、差速貼壁、細(xì)胞因子誘導(dǎo)法制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人源NK細(xì)胞經(jīng)CD56免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含IL-2、IL-15、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細(xì)胞形態(tài) 短梭形
傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
使用方法:
收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%胰消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
熱帶念珠菌ATCC750凍干粉 直立毛霉
泡盛曲霉 蘇云金芽胞桿菌湯普遜亞種Bacillusthuringiensissubsp.thompsoni
水螺菌 ATCC43300凍干粉
改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基90mm 珊瑚色諾卡氏菌
熏衣草灰鏈霉菌 紅串紅球菌
多聚半乳糖醛酸酶(PG)測試盒
果膠酯酶(PE)含量測試盒-NaOH滴定法
ⅠNAD(H)含量測試盒
ⅠNAD(H)含量測試盒
ⅠNAD(H)含量測試盒
源NK細(xì)胞人絨毛膜促性腺激素(HCG)elisa檢測試劑盒
人絨毛膜促性腺激素β(β-HCG)elisa檢測試劑盒
人乳酸脫氫酶(LDH)elisa檢測試劑盒
人乳鐵蛋白(LTF)elisa檢測試劑盒
人沙眼衣原體樣活性因子(CPAF)elisa檢測試劑盒
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