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大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞

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更新時(shí)間:2022-04-13 10:24:38瀏覽次數(shù):163

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào) GOY-01X1194 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 僅供科研使用    
大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞公司其它各種產(chǎn)品致癌基因抗體 促腎上腺皮質(zhì)激素受體
絲裂原活化蛋白8抗體 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子抗體
0酸化絲裂原活化蛋白8抗體 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素結(jié)合蛋白抗體
金屬應(yīng)答元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子-1抗體 促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH(18-39)抗體
MYSM1抗體 促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH (7-23)抗體

詳細(xì)介紹

冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4 30~60 分鐘-20 30 分鐘* → -80 16~18 小時(shí)(或隔夜)液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 –80 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

圖片13.jpg

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞

規(guī)格

5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

貨號(hào)

GOY-01X1194

名稱    大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞
2.組織來(lái)源:眼角膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞分離自眼角膜組織;角膜位于眼球前壁的一層透明膜,約占纖維膜的前1/6,從后面看角膜呈正圓形,從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同,中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢,如有外物接觸角膜,眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明,角膜并沒(méi)有血管,透過(guò)外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層,由前向后依次為:上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。角膜基質(zhì)層是角膜的主要組成部分,占據(jù)角膜厚度的90%,由角膜基質(zhì)細(xì)胞、膠原纖維和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成。角膜基質(zhì)層缺損的修復(fù)主要由角膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖及分泌細(xì)胞外基質(zhì)完成。角膜基質(zhì)層具有結(jié)構(gòu)規(guī)整,透明度高的特點(diǎn),正常情況下角膜基質(zhì)細(xì)胞分泌組成基質(zhì)層的成分,維持角膜的透明度,此細(xì)胞對(duì)于角膜損傷的修復(fù)具有重要意義。角膜基質(zhì)細(xì)胞,存在于角膜基質(zhì)層中,在正常情況下,處于靜止?fàn)顟B(tài)。但當(dāng)角膜損傷時(shí),不同上皮來(lái)源的因子及環(huán)境信號(hào),將影響角膜基質(zhì)細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng),決定著角膜能否*被修復(fù)。

5.方法簡(jiǎn)介:

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞采用膠原酶消化后組織貼塊法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè):

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基 FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin

換液頻率 2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳2-3

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%CO2,5%

培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37水浴中迅速搖晃解凍,加 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2
)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.
棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2.
1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3.
6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4.
將細(xì)胞懸液按 12 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3
)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1.
細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm
離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3.
將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人白細(xì)胞分離液 1.078200mL  0.5mL DNA 離心超濾管 (90-150 KD)1個(gè)

人中性粒細(xì)胞分離液 1.085200mL  0.5mL DNA 離心超濾管 (30-50 KD)1個(gè)

人粒細(xì)胞分離液 1.113200mL  0.5mL DNA 離心超濾管 (150-250 KD)1個(gè)

小鼠腫瘤細(xì)胞分離液 1.070200mL 

小鼠內(nèi)皮細(xì)胞分離液 1.071200mL
二胺氧化酶DAO測(cè)試盒生化分析儀  25ml / 80T 紫外比色法

線粒體呼吸鏈復(fù)合物 活性測(cè)試盒NADH-Q還原酶 20/10 生化法

線粒體呼吸鏈復(fù)合物 活性測(cè)試盒琥珀酸-Q還原酶 20/10 生化法

線粒體呼吸鏈復(fù)合物 活性測(cè)試盒 20/10 生化法

Q-還原酶 20/10
大鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞人生長(zhǎng)分化因子9GDF-9elisa檢測(cè)試劑盒

人生長(zhǎng)激素(GHelisa檢測(cè)試劑盒

人生長(zhǎng)激素釋放肽(Ghrelinelisa檢測(cè)試劑盒

人(SSelisa檢測(cè)試劑盒

人醇結(jié)合蛋白4RBP4elisa檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
產(chǎn)品僅用于科研一、分離與培養(yǎng):
1
、無(wú)菌條件下,取出1-3d SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將成1mm3左右大??;
2
、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4放置;
3
、剩下的組織再加入34mL酶消化液,混懸10s,置37消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4
、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10 FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37 ,5CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5
、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1
、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2
PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4條件下,用0.1Triton X-100透膜15min
3
PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4
、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5
、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37條件下放置1h;
6
、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。


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