細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
![88.jpg 88.jpg](https://img72.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc6bde969098f672f480acb890c71042568e5af405a17cadc80.jpg)
名稱 Kasumi-1 (急性原粒細(xì)胞白血病細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱 KASUMI-1; Kasumi 1; KASUMI1; Kasumi1
年齡(性別) 男;7歲
組織來(lái)源 外周血,急性原粒細(xì)胞白血病
生長(zhǎng)特性 懸浮細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 原粒細(xì)胞
背景描述 Kasumi-1細(xì)胞具有人急性淋巴白血病細(xì)胞的典型特征,是研究人急性淋巴白血病的材料。Kasumi-1細(xì)胞是一個(gè)帶有8:21號(hào)染色體轉(zhuǎn)位的白血病細(xì)胞株,這個(gè)轉(zhuǎn)位使得AML1基因和ETO(或稱MTG8)基因串聯(lián),使融合基因AML1-ETO(也稱作AML1-MTG或RUNX1-CBF2T1)的表達(dá)升高,因而細(xì)胞產(chǎn)生嵌合的AML1-ETO蛋白。這個(gè)蛋白下調(diào)CEBPA mRNA、蛋白和DNA的結(jié)合活性,而這種結(jié)合對(duì)粒性白細(xì)胞的分化是重要的。Kasumi-1細(xì)胞建立于一位急性白血病患者的外周血,Kasumi-1細(xì)胞髓過(guò)氧化物酶陽(yáng)性,顯示其髓性成熟的形態(tài)。增生試驗(yàn)顯示,培養(yǎng)的Kasumi-1細(xì)胞對(duì)IL-3、IL-6、G-CSF(粒細(xì)胞集落刺激因子)、GM-CS(粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子)有響應(yīng),但對(duì)IL-1和IL-5沒(méi)有響應(yīng)。在體外液體培養(yǎng)中分別加入二甲亞砜、G-CSF、IL-5,也沒(méi)有觀察到粒性或嗜酸性細(xì)胞的成熟。Kasumi-1細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,加入佛波酯可以看到誘導(dǎo)出的巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞。
生物安全等級(jí) 1
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 RPMI-1640+20% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時(shí)間 ~48-72 hours
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-2724 DSMZ; ACC-220
![圖片2.jpg 圖片2.jpg](https://img76.chem17.com/6fd5d5abffebbb9e53fdab16daa3bfc687183e52462e599a1bfcf6f51ff2786e5e60e9e0600a9e75.jpg)
使用方法:
收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補(bǔ)充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
巴氏醋桿菌巴氏亞種 Citreicellaaestuarii 模式菌株
拉曼被孢霉 鮑氏志賀菌CMCC51522凍干粉南京便診
蘇云金芽胞桿菌云南亞種Bacillusthuringiensissubsp.yunnanensis 青春雙歧桿菌
屎腸球菌ATCC35667凍干粉 乳酸鏈球菌
淡紫灰鏈霉菌 運(yùn)動(dòng)發(fā)酵單孢菌
APC標(biāo)記的羊抗小鼠IgM
Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗小鼠IgM
PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗小鼠IgM
PE-Cy7標(biāo)記的羊抗小鼠IgM
Cy3標(biāo)記的兔抗人IgA
Kasumi-1 (急性原粒細(xì)胞白血病細(xì)胞)大鼠骨骼肌肌動(dòng)蛋白α1(ACTα1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠骨骼肌快肌肌鈣蛋白I(TNNI2)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠骨骼肌慢肌肌鈣蛋白I(TNNI1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠骨堿性磷酸酶(BALP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
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