細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時,可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
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名稱 HCC38 (乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞)
別稱 Hcc38; HCC-38; HCC 38; HCC0038
年齡(性別) 女;50歲
組織來源 乳腺;乳房/導(dǎo)管
生長特性 貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
背景描述 HCC38細(xì)胞于1992年從一位50歲的白人女性乳腺導(dǎo)管癌組織中分離建立,該患者曾有平滑肌肉瘤的病史,其母親死于乳腺癌;HCC38細(xì)胞癌基因her2/neu-,p53+;上皮細(xì)胞特異性標(biāo)志物EGP2(上皮糖蛋白2)和CK19陽性,ER和PR陰性。
生物安全等級 1
生長培養(yǎng)基 RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,95%;CO2,5%
溫度:37℃
受體表達(dá)情況 estrogen receptor, not expressed; progesterone receptor, not expressed
基因表達(dá)情況 Epithelial glycoprotein 2 [EGP2]; cytokeratin 19
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; CRL-2314
![](https://img74.chem17.com/0052540b3e6e2c7db6f4fc1938612d6627762fe883f1674f1bb433732dfefe6f8f5ad19891dda7e8.png)
使用方法:
收到細(xì)胞后,請按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3. 細(xì)胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細(xì)胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
JM110 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL Zinquin 乙酯5mg
XL2-Blue 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL Y2HGold 酵母化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞10×100μL
DB3.1 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL Y187 酵母感受態(tài)細(xì)胞10×100μL
OrigamiB(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL XL2-Blue 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL
BL21-CodonPlus(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL XL1-Blue 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞0.1mL×10
FITC標(biāo)記的氫離子轉(zhuǎn)運ATP合成酶6G抗體
FITC標(biāo)記的錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白50抗體
FITC標(biāo)記的錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體
FITC標(biāo)記的錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白22抗體
FITC標(biāo)記的錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A3抗體
HCC38 (乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞)大鼠半乳凝素4(GAL4)elisa檢測試劑盒
大鼠半乳凝素8(GAL8)elisa檢測試劑盒
大鼠半乳糖-1-磷酸尿苷酰轉(zhuǎn)移酶(GALT)elisa檢測試劑盒
大鼠半乳糖凝集素3(Galectin3)elisa檢測試劑盒
大鼠半乳糖凝集素-3(Galectin3)elisa檢測試劑盒
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