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詳細介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Fluo-2, AM | 1mg | GOY-F10179 |
產(chǎn)品詳細介紹：
Fluo-2 早是由Roger Tsien 博士發(fā)明的鈣離子指示劑Fluo 系列之一，目前，Fluo-3 和Fluo-4 已成熟商品化。然而，Fluo-2 在細胞內(nèi)比Fluo-4 要更明亮，主要可能是由于大部分細胞對FLuo-2 的加載能力要高于FLuo-4。 Fluo-3 成像涉及到鈣離子信號通路的多個方面，Fluo-3 經(jīng)常應(yīng)用在流式細胞術(shù)上，如螯合劑光活化、第二信使、神經(jīng)遞質(zhì)以及細胞水平的藥理篩選。Fluo-3 在這些應(yīng)用里之所以能大量運用主要是由于其幾個重要特性：Fluo-3 可以被氬離子激光器488nm 激發(fā)，并在與Ca2+結(jié)合后，發(fā)射熒光很明亮的熒光信號。Fluo-4 是Fluo-3 以兩個氟原子取代氯原子的類似物，這一微小的結(jié)構(gòu)變化使得Fluo-4探針在488nm 激發(fā)光下的熒光信號得到增強，信號穩(wěn)定持續(xù)，可以應(yīng)用于共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、微孔板讀數(shù)儀。 Fluo-2、Fluo-3 和Fluo-4 在與Ca2+結(jié)合后熒光增強，與紫外激發(fā)的探針fura-2 和indo-1 不同，不會發(fā)生光譜漂移。熒光光密度在與Ca2+結(jié)合后，增強至少100 倍。 儲存：-20℃，避光，有效期12個月。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細胞懸液 離心收集細胞，每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
兔干擾素-β(rabbit IFN-β) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進口分裝 5-Benzyl D-glutamate 中文名：D-谷5-苯甲酯 分子式：C12H15NO4 度：98.0%
兔干擾素-r(rabbit IFN-r) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進口分裝 5-Benzyl D-glutamate 中文名：D-谷5-苯甲酯 分子式：C12H15NO4
兔干擾素-a(rabbit IFN-a) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進口分裝 5-Benzyl L-glutamate 1676-73-9 中文名：L-谷5-芐酯 分子式：C12H15NO4
兔肝細胞生長因子(rabbit HGF) 作用： ELISA 規(guī)格： 48T/96T 進口分裝 5-[Bis(2-hydroxyethyl)amino]-1-methyl-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester 3543-74-6 中文名： 分子式：C18H27N3O4
兔分泌型球蛋白Aelisa試劑盒 兔分泌型球蛋白A試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔分泌型球蛋白A試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔分泌型球蛋白A試劑盒、兔分泌型球蛋白A elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 4-Hydroxy-2-(3-methoxypropyl)-3,4-dihydro-2H-thieno[3,2-e][1,2]thiazine-6-sulfonamide 1,1-dioxide 中文名： 分子式：C10H16N2O6S3
N-硝基-L-精甲酯 N'-Nitro-L-arginine-methyl ester 質(zhì)量規(guī)格：>98% Ratphospho-exacellularsignal-regulatedkinase,pERKELISAKit大鼠0酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
N-苯甲酰-L-酪乙酯(BTEE) N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester 質(zhì)量規(guī)格：>98% GPDGP(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升
AEBSF絲抑制劑 AEBSF HCl 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR MouseSubstanceP,SPELISA試劑盒小鼠P物質(zhì)(SP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
AEBSF(進分) AEBSF HCl 質(zhì)量規(guī)格：>97%,進分TCI A2215 小鼠顆粒酶A(GZMA)ELISA試劑盒 ，英文名： GZMA ELISA Kit
鹽酸貝他定(進口) Bestatin HCl 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,美國進口 人芳香烴受體(AhR)ELISA檢測試劑盒Humanarylhydrocarboeceptor,AhRELISAKit 96T/48T
鄰菲啰啉鹽酸鹽，一水 1,10-Phenanthroline monohydrate 質(zhì)量規(guī)格：>99% 大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)試劑盒 Rat Serum amyloid A,SAA ELISA Kit
膦酰二肽鈉 Phosphoramidon di salt 質(zhì)量規(guī)格：0.99 英文名稱RatLPSELISAKit大鼠脂多糖(LPS)規(guī)格：96T/48T
癸基喃葡萄糖;癸基吡喃葡萄糖苷 Decyl β-D-glucopyranoside 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 高多糖多酚植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒10/20
德羅特韋(GSK-1349572,DTG) Dolutegravir,GSK1349572 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR ELISAKitfPSA人游離前列腺特異性抗原規(guī)格：48T/96T
十二烷基吡喃葡萄糖苷；月桂?；咸烟?/span> Dodecyl glucopyranoside 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR 小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒 ，英文名： EMAb ELISA Kit
Fluo-2, AM(Ca2+ GPCR分析-鈣離子指示探針)細胞AMPK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織PKC激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細胞PKC激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織Src激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細胞Src激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
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