詳細介紹
DNA提取流程圖:
下列是產品的訂購信息!產品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 貨號 |
Alexa Fluor 488 NHS Ester (Succinimidyl Ester) | 1mg | GOY-F10229 |
產品詳細介紹:
本品是一種亮綠色熒光染料,具有水溶性和較強的pH穩(wěn)定性(pH4-10),可被488nm激發(fā)產生信號穩(wěn)定的熒光,常作為一種細胞標記物偶聯到抗體、多肽、蛋白、示蹤劑和其他底物上廣泛用于細胞成像和檢測。 Alexa Fluor 488 NHS Ester,即含N-羥基琥珀酰亞胺(N-Hydroxysuccinimide)活化基團的Alexa Fluor 488,可直接與生化分子上的氨基(-NH2)反應形成穩(wěn)定的酰胺鍵,主要是伯胺,可用于標記任何含伯胺的蛋白、多肽、氨基修飾的寡核苷酸或者其他含氨基的生物分子。 熒光團(Fluorophore Label):Alexa Fluor 488 dye 活性基團(Reactive Group):NHS ester 反應性(Reactivity):伯胺(R-NH2) 分子式:C25H15Li2N3O13S2 分子量:643.4 外觀:粉末 Ex/Em:494/517 nm 摩爾吸光系數:71,000 cm-1M-1 校正因子(CF280):0.11 儲存條件:-20℃,有效期3個月 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,植物結節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側和管底出現膠狀沉淀。移去上清。
乳酸(lacticacid)測定試劑盒(測血清、組織等)(比色法) Rhein 478-43-3 中文名:大黃酸 分子式:C15H8O6 度:98.0% 關鍵詞:
肉毒桿菌(E/F型)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T Withaphysalin A 57423-72-0 中文名: 分子式:C28H34O6
肉毒桿菌(A/B型)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T Withaphysalin A 57423-72-0 中文名: 分子式:C28H34O6 度:98.0% 關鍵詞:
溶酶體相關膜蛋白3 英文名稱: Human Lysosomal Associated membrane protein 3 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: LAMP3 3-Acetyl-2,5-dichlorothiophene 36157-40-1 中文名: 分子式:C6H4Cl2OS 度:98.0% 關鍵詞:
標準品 Standard for lysozyme Ranitidine 66357-59-3 中文名:鹽酸 分子式:C13H23ClN4O3S
雙甘氨二肽 Gly-Gly 質量規(guī)格:>99%,BR Mouseα1-microglobulin,α1-MGELISA試劑盒小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
重組人胰島素 Human recombinant Insulin 質量規(guī)格:效價測定 小鼠睫狀神經營養(yǎng)因子(CF)ELISA試劑盒 ,英文名: CF ELISA Kit
人胰島素 Human Insulin 質量規(guī)格:測定用 大鼠卵巢癌標志物CA125ELISA檢測試劑盒Ratovariancancermarker-CA125ELISAKit 96T/48T
硝酸舍他康唑 Sertaconazole nitrate 質量規(guī)格:>98%,BR 人促睡眠肽(DSIP)試劑盒 Human delta sleep-inducing peptide,DSIP ELISA Kit
醋酸依降鈣素 Elcatonin Acetate 質量規(guī)格:BR RatskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISAKit大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α(smActinin-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
醋酸恩夫韋地 Enfuvirtide Acetate 質量規(guī)格:BR,>98% HRP標記一抗50微克
D-海藻糖無水 D-(+)-Trehalose Anhydrous 質量規(guī)格:≥99%,BR Mouseα2-Aiplasmin,α2-APELISA試劑盒小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
二醋酸戈那瑞林(LH-RH) Gonadorelin Acetate 質量規(guī)格:>98%,二醋酸鹽 小鼠睫狀神經營養(yǎng)因子(CF)ELISA 試劑盒
醋酸戈舍瑞林 Goserelin Acetate 質量規(guī)格:BR,>98% Rat platelet aibodies IgG/M/A (PA-IgG/M/A) ELISA Kit 大鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒
醋酸亮丙瑞林 Leuprolide Acetate 質量規(guī)格:BR,>98% Humandeltasleep-inducingpeptide,DSIPELISAKit 人促睡眠肽(DSIP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Alexa Fluor 488-N-羥基琥珀酰亞胺酯血液血管緊張素Ⅰ轉化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉移法(FRET)定量檢測試劑盒
組織血管緊張素Ⅰ轉化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉移法(FRET)定量檢測試劑盒
細胞血管緊張素Ⅰ轉化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉移法(FRET)定量檢測試劑盒
體液血管緊張素Ⅰ轉化酶1(ACE1)活性熒光定量檢測試劑盒
血液血管緊張素Ⅰ轉化酶1(ACE1)活性熒光定量檢測試劑盒
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數)