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詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購(gòu)信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
2×SYBR qPCR Mix | 1mL | GOY-F10254 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
本產(chǎn)品是基于熒光染料檢測(cè)的即用型PCR試劑盒，可以對(duì)靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR分析（qPCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過(guò)優(yōu)化的緩沖液組分、Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2及熒光染料等所有實(shí)時(shí)定量PCR所需要的成分，用戶(hù)只需加入模板和引物即可進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)和HRM分析，具有廣泛的用途。 產(chǎn)品特點(diǎn)： 方便，用戶(hù)只需準(zhǔn)備模板和引物既可以進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)。 使用第三代飽和型熒光染料，信號(hào)強(qiáng)，不會(huì)抑制PCR反應(yīng)。 快捷，即用型的預(yù)配液使加樣操作步驟大大簡(jiǎn)化，避免了交叉污染，降低實(shí)驗(yàn)誤差。 各成分的濃度和比例都經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。能檢測(cè)到濃度為50拷貝/mL的靶分子。 保存：-20℃，有效期6個(gè)月。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí)，上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相，進(jìn)一步操作見(jiàn)后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
人脂肪酶(Lipase)ELISA試劑盒 2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinone 中文名： 分子式：C11H7NO4
人脂肪分化相關(guān)蛋白(ADRP)ELISA試劑盒 2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinone 103646-20-4 中文名： 分子式：C11H7NO4 度：% 關(guān)鍵詞：
人脂多糖結(jié)合蛋白elisa試劑盒 人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒 規(guī)格型號(hào)：96T/48T 人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒、人脂多糖結(jié)合蛋白elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個(gè)月。 2-Benzylacrylic acid 5669-19-2 中文名： 分子式：C10H10O2
人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒 Human LBP (Lipopolysaccharide Binding Protein) ELISA Kit 2-Aminophenyl phenyl sulfone 中文名：2-氨基二苯砜 分子式：C12H11NO2S
人脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)ELISA試劑盒 2-Carbamoyl-3-hydroxy-1,4-naphthoquinone 103646-20-4 中文名： 分子式：C11H7NO4
氯化血紅素;血晶素 Hemin 質(zhì)量規(guī)格：0.98 大鼠抗IVIgG抗體ELISA檢測(cè)試劑盒Ratai-IVIgGaibodyELISAKit 96T/48T
5- 羧基熒光素二乙酸酯；5-CFDA 5-Carboxyfluorescein diacetate 質(zhì)量規(guī)格：0.95 人雌二(E2)試劑盒 Human Esadiol,E2 ELISA Kit
5(6)-羧基熒光素二乙酸酯 5(6)-Carboxyfluorescein diacetate 質(zhì)量規(guī)格：0.9 RatsolubleP-selectin,sP-selectinELISAKit大鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
5-氨基熒光素 5-Aminofluorescein 質(zhì)量規(guī)格：>95% IL蛋白共沉淀分析試劑盒5
6-氨基熒光素 6-Aminofluorescein 質(zhì)量規(guī)格：0.95 NudeMouseClaracellprotein,CC16ELISA試劑盒裸鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
5(6)-氨基熒光素 5(6)-Aminofluorescein 質(zhì)量規(guī)格：0.9 小鼠甲狀腺球蛋白(TG)ELISA 試劑盒
5-FAM, SE；5-羧基熒光素琥珀酯 5-Carboxyfluorescein N-succinimidyl ester 質(zhì)量規(guī)格：0.9 Rat soluble cell differeiation aigen 14 (sCD14) ELISA Kit 大鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原14(sCD14)ELISA試劑盒
5,6-FAM；5(6)-羧基熒光素 5(6)-Carboxyfluorescein 質(zhì)量規(guī)格：0.95 Humaetinoicacidinduciblegene/RIG-likereceptor,RLR-9ELISAKit 人酸誘導(dǎo)基因/RIG-1樣受體(RLR)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
5(6)-FAM, SE; 5(6)-羧基熒光素琥珀酯 5(6)-FAM, SE 質(zhì)量規(guī)格：>90% Humanai-fibrillarinaibody,AFA/snoRNP/U3RNPELISA試劑盒人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
S-腺苷-L-蛋;S-腺苷甲硫 S-adenosyl-L-mine (SAM) 質(zhì)量規(guī)格：BR,度>96%,干品腺苷蛋>49% 植物精(arginine)含量化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒20
熒光定量PCR Mix(染料法)植物亞硝酸鹽還原酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
藻類(lèi)細(xì)胞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
真菌/酵母細(xì)胞硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
植物硝酸鹽還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
植物谷氨酰半胱合成酶（glutamyl systeine synthetase）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
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