詳細(xì)介紹
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
PCR Master Mix (Orange, 2X) | 400次|2000次10000次 | GOY-F10282 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
本品是含有橙色染料(電泳位置約50bp)的2倍濃度的PCR預(yù)混液,含有2X Taq DNA Polymerase、2X PCR Buffer、2X dNTP和2X Loading Buffer,只需加入模板DNA、引物和水即可進(jìn)行PCR擴增,并且擴增完畢后可以直接上樣電泳。主要適用于cDNA或基因組DNA等的常規(guī)PCR擴增,特別適合于定性或半定量的PCR擴增,也可用于長度小于2kb的DNA片段的擴增和克隆。 本品中已經(jīng)含有所有的通用組分,用戶只需自備引物、模板DNA和水即可進(jìn)行PCR擴增。大大簡化了PCR操作,使操作更加快捷,也減少了PCR操作過程中可能導(dǎo)致的污染,使PCR的重復(fù)性更好??梢詳U增出長達(dá)8kb的片段,但通常更適合用于擴增2kb以下的DNA片段。 本產(chǎn)品中加入了橙色的電泳示蹤染料,其在濃度為1%瓊脂糖膠中的遷移位置大約位于50bp處。PCR結(jié)束后可直接進(jìn)行電泳檢測,無需再添加上樣緩沖液。橙色示蹤染料不會影響對相應(yīng)DNA條帶的觀察和檢測。 本產(chǎn)品反復(fù)凍融15次前后擴增不同長度產(chǎn)物的效果圖。A. 反復(fù)凍融前本產(chǎn)品進(jìn)行PCR的擴增結(jié)果。B.反復(fù)凍融15次后的本產(chǎn)品進(jìn)行PCR的擴增結(jié)果。除本產(chǎn)品是否反復(fù)凍融15次外,A和B的反應(yīng)體系*相同,電泳的上樣量也相同。 儲存條件:-20℃,有效期一年。 |
DNA提取流程圖:
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,每5-10×106動物、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,進(jìn)一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
人復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)ELISAKit 3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid 中文名: 分子式:C17H23NO5
人多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒 Human MRP1 (Multidrug Resistance Associated Protein 1) ELISA Kit 2-Deoxy-2,2-difluoro-D-erythro-pentafuranous-1-ulose-3,5-dibenzoate 中文名: 分子式:C19H14F2O6 度:98.0%
人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISAKit Timosaponin B-II 中文名:知母皂苷B-II 分子式:C45H76O19
人抵抗素(Resistin)ELISAKIT 3,4-Didehydrosapriparaquione 142763-37-9 中文名: 分子式:C20H24O3
人單皰疹病毒抗原2(HSV-Ag2)ELISAKit 3-(Hydroxymethyl)-3-nitro-1-(4-octylphenyl)-1,4-butanediol 899822-99-2 中文名: 分子式:C19H31NO5
α-酮戊二酸(標(biāo)準(zhǔn)品) 2-Ketoglutaric acid 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 PlaVitaminB6,VB6ELISA試劑盒植物B6(VB6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
α-酮戊二酸 2-Ketoglutaric acid 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)ELISA試劑盒 ,英文名: MMP8 ELISA Kit
卡博替尼 ;XL184 Cabozantinib(BMS907351) 質(zhì)量規(guī)格:>99%,廣譜酪激酶抑制劑 人鞘0脂(SM)ELISA檢測試劑盒Humansphingomyelin,SMELISAKit 96T/48T
D-絲乙酯鹽酸鹽 H-D-SER-OET HCL 質(zhì)量規(guī)格:>98% 大鼠纖維蛋白原(Fb)試劑盒 Rat Fibrinogen,Fb Elisa Kit
馬來酸阿森那平 Asenapine Maleate 質(zhì)量規(guī)格:>99% 英文名稱RatAngiogeninELISAKit大鼠血管生長素(Angiogenin)規(guī)格:96T/48T
三苯甲基坎地沙坦西來替昔酯 Trityl candesartan cilexetil 質(zhì)量規(guī)格:>99% 果菜比色法定量檢測試劑盒20
他莫昔芬 Tamoxifen 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR ELISAKitHbCO人血紅蛋白規(guī)格:48T/96T
頭孢替安鹽酸鹽 Cefotiam 質(zhì)量規(guī)格:>800 µg/mg,USP 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)ELISA試劑盒 ,英文名: MMP7 ELISA Kit
頭孢替安鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品) Cefotiam 質(zhì)量規(guī)格:效價測定 人酸性0酸酶(ACP)ELISA檢測試劑盒HumanAcidPhosphatase,ACPELISAKit 96T/48T
絡(luò)塞定(標(biāo)準(zhǔn)品) (2E,4S)-4-Hydroxy-3,7-dimethyl-2,6-octadien-1-yl beta-D-glucopyranoside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)試劑盒 Rat Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit
2×PCR Master Mix (含橙色染料)真菌/酵母酶(glutaminase)活性比色法(405)定量檢測試劑盒
細(xì)菌酶(glutaminase)活性比色法(405)定量檢測試劑盒
植物酶(glutaminase)活性比色法(405)定量檢測試劑盒
組織酶(glutaminase)活性比色法(405)定量檢測試劑盒
細(xì)胞酶(glutaminase)活性比色法(405)定量檢測試劑盒